[发明专利]显示增加的备选FVIII辅因子功能活性的双特异性抗体

说明书

本发明提供改善ACE910(Emicizumab)的FVIII辅因子功能替代活性的轻链氨基酸取代，显示FVIII辅因子功能替代活性的新型轻链，以及改善含有新型轻链的双特异性抗体的FVIII辅因子功能替代活性的重链氨基酸取代。

技术领域

本发明涉及具有增强的FVIII辅因子功能替代活性的抗体，包含此类抗体作为活性成分的药物制剂，产生此类抗体的方法等。更具体地，本发明涉及具有高于ACE910(Emicizumab)的FVIII辅因子功能替代活性的双特异性抗体。

背景技术

血友病A是由凝血因子VIII(FVIII)功能的遗传性降低或缺乏引起的出血异常。针对出血，一般向血友病A患者施用FVIII制剂(按需施用)。近年来，FVIII制剂被预防性地施用以预防出血事件(非专利文献1和2)(预防性施用)。FVIII制剂的血液半衰期约为12小时至16小时。因此，为了持续预防，将FVIII制剂一周三次施用于患者(非专利文献3和4)。在按需施用中，还在必要时定期额外施用FVIII制剂以预防再出血。此外，FVIII制剂是静脉内施用的。因此，强烈需要比FVIII制剂具有更少施用负荷的药剂。

针对FVIII的抗体(抑制剂)偶尔在血友病患者中产生。这些抑制剂抵消了FVIII制剂的效果。对于已经产生出抑制剂的患者(抑制剂患者)的出血，施用旁路制剂。它们的作用机制不依赖于FVIII功能，其为通过活化凝血因子IX(FIXa)催化凝血因子X(FX)活化的功能。因此，在一些情况下，旁路制剂不能充分阻止出血。因此，强烈需要不受抑制剂存在影响并且可以替代FVIII功能的药剂。

作为解决这些问题的手段，替代FVIII功能的双特异性抗体及其用途(专利文献1、2、3和4)已被报道。针对FIXa和FX的双特异性抗体可以替代FVIII功能并通过将这两个因子定位在附近来显示出FVIII辅因子功能替代活性(非专利文献5)。针对FIXa和FX的双特异性抗体的FVIII辅因子功能替代活性是指通过FIXa使用比色测定方法检查FX活化反应和使用血友病A血浆的凝血酶生成测定计算的活性。据报道，抗体的FVIII辅因子功能替代活性可通过优化对FIXa和FX的亲和力而增强(非专利文献6)。另外，已知抗体的FVIII辅因子功能替代活性受IgG同种型、二硫键模式、铰链区的氨基酸序列以及在Fc区中糖链的存在或不存在影响(非专利文献7)。据报道ACE910(Emicizumab)(其为这些抗体之一并具有高FVIII辅因子功能替代活性)在血友病的猴模型中显示出止血效果(非专利文献8和9)。另外，在ACE910(Emicizumab)对健康受试者的临床试验中，已经证实了优异的药代动力学(长半衰期)和耐受性(非专利文献10)，并且在有或没有抑制剂的血友病A患者的临床试验中，与ACE910(Emicizumab)施用前相比，ACE910(Emicizumab)施用显著抑制了出血发作(episodes)的数量(非专利文献11)。

如上所述，在临床试验中，针对ACE910(Emicizumab)，观察到对出血发作数量的抑制效果。然而，由于通过ACE910(Emicizumab)对使用FVIII缺乏血浆的体外凝血酶生成测定中凝血酶生成的最大量(峰高)的改善效果低于FVIII活性的正常水平，即100U/dL(非专利文献8)，因此期望进一步提高药效。此外，期望能够通过改善特异性活性进一步降低施用剂量的双特异性抗体等。

ACE910(Emicizumab)是具有高FVIII辅因子功能替代活性的双特异性抗体，其制备如下：将通过动物免疫获得的抗FIX抗体和/或抗FIXa抗体以及抗FX抗体人源化以获得hBS1作为前导(lead)抗体；且将许多氨基酸取代引入前导抗体中以对其进行多边优化(非专利文献6和专利文献4)。为了提高药物功效和改善特异性活性，需要替代FVIII功能的双特异性抗体，其具有比ACE910(Emicizumab)更高的最大活性(最大FVIII辅因子功能替代活性)并且还可以在低于ACE910(Emicizumab)的浓度下显示出FVIII辅因子功能替代活性。然而，至今，从浓度和最大活性的观点来看，没有关于具有高于ACE910(Emicizumab)的FVIII辅因子功能替代活性的双特异性抗体的报道。