[发明专利]α-溶血素变体及其用途

权利要求书

1.α-溶血素(α-HL)变体，其由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成。

2.根据权利要求1所述的α-溶血素变体，其中所述变体中的V149K取代包含一个正电荷。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的α-溶血素变体，其中所述α-溶血素变体与DNA聚合酶共价结合。

4.根据权利要求3所述的α-溶血素变体，其中所述变体经由异肽键与DNA聚合酶结合。

5.七聚体纳米孔组装体，其包含至少一个根据权利要求1-4中任一项所述的α-溶血素(α-HL)变体。

6.根据权利要求5所述的七聚体纳米孔组装体，其中所述孔组装体相对于由天然α-溶血素组成的孔复合物具有降低的穿入时间(TTT)。

7.编码根据权利要求1-4中任一项所述的α-HL变体的核酸。

8.权利要求7的核酸分子，其中所述核酸分子编码SEQ ID NO:4的α-溶血素变体。

9.载体，其包含根据权利要求7-8中任一项所述的编码α-溶血素变体的核酸。

10.用权利要求9的载体转化的宿主细胞。

11.产生α-溶血素变体的方法，其包括以下步骤：

(a) 在合适的条件下在合适的培养基中培养根据权利要求10所述的宿主细胞以产生α-溶血素变体；

(b) 获得所述产生的α-溶血素变体。

12.用于检测靶分子的方法，其包括：

(a) 提供芯片，其包含在膜中的根据权利要求5-6所述的纳米孔，所述膜被布置为邻近或接近传感电极；

(b) 引导核酸分子通过所述纳米孔，其中所述核酸分子与报告分子缔合，其中所述核酸分子包含寻址区域和探针区域，其中所述报告分子与所述核酸分子在所述探针区域缔合，并且其中所述报告分子与靶分子偶联；

(c) 在引导所述核酸分子通过所述纳米孔的同时对所述寻址区域进行测序，以确定所述寻址区域的核酸序列；和

(d) 借助于计算机处理器，基于在(c)中确定的所述寻址区域的核酸序列鉴定所述靶分子。