[发明专利]用于产生表达生物合成通路的合成染色体的方法及其用途

权利要求书

1.一种用于在受体细胞中构建生物合成通路的方法，所述方法包括：

用合成染色体产生组分转染受体细胞系，所述合成染色体产生组分包括允许靶核酸序列位点特异性整合的核酸序列；

产生具有多于一个位点特异性重组位点的合成的平台染色体；用包含能够实现生物合成通路的多于一个基因的递送载体转染所述受体细胞系，其中所述递送载体包含至少一个位点特异性重组位点；

激活所述合成的平台染色体与所述递送载体之间的位点特异性重组，其中能够实现生物合成通路的所述多于一个基因被装载到所述合成的平台染色体上以产生表达所述生物合成通路的合成染色体；以及

分离包含表达所述生物合成通路的所述合成染色体的受体细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中能够实现生物合成通路的所述多于一个基因包括色氨酸生物合成所必需的基因。

3.如权利要求2所述的方法，其中色氨酸生物合成所必需的基因包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的色氨酸合成所必需的五个基因。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述递送载体还包含a)干扰或阻断肿瘤细胞抑制免疫细胞周期进展的能力的一个或更多个基因，b)编码增强免疫细胞活化和生长的因子的一个或更多个基因，或c)增加免疫细胞对发展中肿瘤的特异性的一个或更多个基因。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述递送载体包含a)、b)或c)中的至少两个。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述递送载体包含a)、b)和c)中的所有三个。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，所述方法还包括以下步骤：

分离表达所述生物合成通路的所述合成染色体；以及

将所述合成染色体转移至第二受体细胞。

8.如权利要求7所述的第二受体细胞。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述第二受体细胞选自通用供体T细胞或患者自体T细胞。

10.如权利要求9所述的第二受体细胞。

11.如权利要求1所述的方法，其中允许位点特异性整合的所述核酸序列包括attP、attB、attL和attR或突变形式的attP、attB、attL和attR。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述递送载体是BAC。

13.合成染色体，所述合成染色体表达权利要求1所述的生物合成通路。

14.受体细胞，所述受体细胞包含表达权利要求1所述的生物合成通路的合成染色体。

15.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括以下步骤：

用包含能够实现第二生物合成通路的多于一个基因的第二递送载体转染所述受体细胞系，其中所述第二递送载体包含至少一个位点特异性重组位点；

激活所述合成的平台染色体与所述第二递送载体之间的位点特异性重组，其中能够实现第二生物合成通路的所述多于一个基因被装载到所述合成的平台染色体上以产生表达所述第二生物合成通路的合成染色体；以及

分离包含表达所述第二生物合成通路的所述合成染色体的受体细胞。

16.合成染色体，所述合成染色体表达权利要求15所述的第二生物合成通路。

17.如权利要求15所述的方法，所述方法还包括以下步骤：

分离表达所述第二生物合成通路的合成染色体；和

将表达所述第二生物合成通路的所述合成染色体转移至第二受体细胞。