[发明专利]基因递送的改进方法

说明书

本发明提供了用于对靶细胞进行基因递送或遗传修饰的改进方法，其中对靶细胞的基因递送或其它遗传修饰在内皮细胞的存在下进行，或在靶细胞与内皮细胞共培养后进行，或者，其中在基因递送后立即将靶细胞与内皮细胞共培养以便对在基因递送过程中可能被破坏的细胞进行拯救。在一些实施方式中，基因递送通过转染来进行。在一些实施方式中，基因递送通过转导来进行。在一些实施方式中，内皮细胞是器官特异性的内皮细胞。在一些实施方式中，内皮细胞为表达E4ORF1的内皮细胞(E4ORF1+EC)。在一些实施方式中，靶细胞是干细胞，例如造血干细胞。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年4月15日提交的美国临时专利申请No.62/323,476，以及2016年10月1日提交的美国临时专利申请No.62/403,110的优先权，其内容在此以引用的方式整体并入本文。

通过引用的方式并入

仅用于那些允许通过引入的方式并入的行政辖区，本申请中引用的所有参考文献(包括但不限于出版物，专利申请，专利和其他参考文献)，其全文以引用的方式整体并入本文。此外，本文引用或提及的任何产品的任何制造商说明书或目录都通过引用并入本文。在美国专利No.8,465,732中提供的许多教导可以与本发明结合使用，或可适用于本发明。因此，美国专利No.8,465,732的全部内容通过引用明确并入本申请。通过引用并入本文中的文件，或其中的任何教导，可用于本发明的实践中。

背景技术

腺病毒早期4(E4)区包含至少6个开放阅读框(ORF)。已报道整个E4区可以调节血管生成和促进内皮细胞存活(Zhang et al.(2004)，J.Biol.Chem.279(12)：11760-66)。在整个E4区内，E4ORF1序列负责内皮细胞中的这些生物学效应(美国专利No.8,465,732；和Seandel et al.(2008)，PNAS，105(49)：19288-93)。已经发现，被工程化为表达E4ORF1的内皮细胞在多种共培养方法中是特别有用的，其中它们可用于支持各种不同细胞类型的扩增，否则这些细胞类型难以在培养物中维持或扩增，如各种干细胞，包括造血干细胞(美国专利No.8,465,732；和Seandel et al.(2008)，PNAS，105(49)：19288-93)。

基因治疗，例如采用基因编辑技术，为对抗大量的遗传障碍和疾病提供一种有前景的潜在解决方案。然而，本领域克服的主要障碍是高效地遗传修饰足够数量的用于移植的自体细胞，以及修饰最有可能是治疗有效的细胞类型的能力。在用于血液紊乱的基因治疗中，这种细胞类型包括造血干细胞(HSC)和组织特异性的再填充干细胞(tissue-specific repopulating stem)和祖细胞。采用针对该关键造血细胞群的基因修正和其它基因治疗技术，可以更有效地治疗几种血液紊乱。不幸的是，到目前为止已经证明在这些和其它细胞中的基因修正的尝试大部分是无效率的。

几种细胞转导和转染技术(如电穿孔)可引起显著的细胞应激和细胞损伤，这经常会导致细胞死亡。因此，通常只有部分细胞被成功转导或转染。这是基因递送至干细胞中的特殊问题，并且在需要大量健康的，有活力的，转导的或转染的细胞的应用中也是一个特定的问题。

发明内容

本发明部分地基于在本专利公开的“实施例”这一部分中进一步描述的某些新发现和过程。

例如，现已发现，当基因递送与内皮细胞共培养(例如与已被优化为能在体外(exvivo)培养的内皮细胞(如表达E4ORF1基因(E4ORF1+EC)的内皮细胞)共培养)相结合进行时，可以显著提高基因递送至“靶细胞”的效率，和/或成功转染的或转导的靶细胞(包括干细胞)的产量。