[发明专利]包含CCL3变体的融合蛋白及其用途

说明书

提供了具有改善的体内持久性、蛋白质稳定性和药理活性的具有CCL3变体的融合蛋白及其用途，更具体地，提供了包含CCL3变体和免疫球蛋白Fc区的融合蛋白以及其作为用于淋巴细胞减少症、癌症或感染的治疗剂的用途，其中野生型CCL3α或CCL3β的N末端氨基酸被缺失并且在所述CCL3变体中在所述野生型CCL3α或CCL3β的相同位置处，特定位置的氨基酸被不同氨基酸取代。

技术领域

本发明涉及具有改善的体内持久性、蛋白质稳定性和药理活性的包含CCL3变体的融合蛋白，更具体地，涉及包含CCL3变体和免疫球蛋白Fc区的融合蛋白，以及其作为用于淋巴细胞减少症、癌症或感染的治疗剂的用途，其中野生型CCL3α或CCL3β的N末端氨基酸被缺失并且在CCL3变体中在野生型CCL3α或CCL3β的相同位置处，特定位置的氨基酸被不同氨基酸取代。

背景技术

趋化因子以具有趋化性的细胞因子形式由各种免疫细胞分泌并且与免疫细胞中表达的趋化因子受体结合，以促进免疫细胞的体内移动性。在趋化因子中，CC型配体3(CCL3)是包括小噬细胞的免疫细胞中分泌的趋化因子并且已知涉及表达CC型受体CCR1/CCR5的免疫细胞的移动性，所述免疫细胞诸如树突细胞、T细胞、单核细胞和中性粒细胞(CytokineGrowth Factor Reviews(2002)13:455-481)。

CCL3，被称为巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)，在小鼠中仅有一种亚型，但在人类中有两种亚型(CytokineGrowth Factor Reviews(2002)13:455-481)。因此，CCL3包括与小鼠的CCL3具有同源性的α型(LD78α或CCL3α，在下文中为CCL3α)和通过进化过程中的基因突变产生的β型(LD78β或CCL3β，在下文中为CCL3β)。

在相关技术中，已知CCL3抑制小鼠骨髓中未成熟血液干细胞的分裂和分化，并且可以增加血液中免疫细胞的浓度(Nat Rev Immunol.(2006)6(2):159-64)。因此，CCL3已被用作用于治疗淋巴细胞减少症的治疗剂靶标，其存在于各种抗癌剂中(Exp.Hematol.(1999)27:195-202,CytokineGrowth Factor Reviews(2002)13:455-481)。此外，由于CCL3具有增加血液中树突细胞浓度的作用，所以已知当与能够将肿瘤特异性抗原暴露在血液中的治疗方法组合时，CCL3可能具有作为新型免疫抗癌剂的潜力(Clin Cancer Res.(2008)14(4):1159-1166,European Journal of Cancer(1998)34(7):1023-1029)。

同时，由于CCL3具有非常短的半衰期并且易于沉淀，所以CCL3在未经修饰的情况下不适合用作生物治疗剂。因为静脉内注射到人体内的CCL3的体内半衰期短至约1.7小时或更短，所以如果CCL3被开发为抗癌剂或淋巴细胞减少症的治疗剂，则需要每天施用药剂(European Journal of Cancer(1998)34(7):1023-1029)。此外，即使在低至0.1mg/mL的浓度下，CCL3也通过形成聚合物质而沉淀。

因此，为了开发CCL3作为药物或免疫抗癌剂，可以通过取代或去除野生型CCL3的一些氨基酸来制备CCL3变体(CCL3变体)，并且/或者可以通过将聚合物或另外的蛋白质与CCL3组合来制备融合蛋白。已知通过组合聚合物或另外的蛋白质可以增加半衰期。例如，可以将活性蛋白质与人白蛋白或聚乙二醇(PEG)结合。然而，通过人白蛋白的结合仅略微增加驻留时间，并且受体结合亲和力可能由于PEG结合中的空间位阻而降低。

考虑到这一点，最近进行了研究和开发以通过使用免疫球蛋白(Ig)制备的融合蛋白增加体内半衰期。人Ig(hIg)包括各种类别，诸如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，并且可以进一步分类为被称为人IgG1(hIgG1)、人IgG2(hIgG2)、人IgG3(hIgG3)和人IgG4(hIgG4)的各种亚型。