[发明专利]富含甘油三酯的脂蛋白中的胆固醇的定量方法以及定量试剂

说明书

公开了不需要繁杂的操作、更特异性地定量被检试样中的富含甘油三酯的脂蛋白中的胆固醇(TRL‑C)的方法以及试剂。富含甘油三酯的脂蛋白中的胆固醇的定量方法包含：通过使分子量超过50kDa的胆固醇酯酶和表面活性剂产生作用、选择性地消除富含甘油三酯的脂蛋白(TRL)以外的脂蛋白中的胆固醇的步骤(1)，和定量残存的TRL中的胆固醇(TRL‑C)的步骤(2)。

技术领域

本发明涉及富含甘油三酯的脂蛋白(下文有时称为TRL)中的胆固醇(下文表示为“脂蛋白名称”胆固醇或“脂蛋白名称”-C时，意味着“”内记载的脂蛋白中的胆固醇)的定量方法以及定量试剂。

背景技术

根据利用超速离心分离的密度的差异，血液中包含的脂蛋白分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白(下文有时称为VLDL)、中间密度脂蛋白(下文有时称为IDL)、低密度脂蛋白(下文有时称为LDL)、高密度脂蛋白(下文有时称为HDL)。已知这些脂蛋白的甘油三酯、胆固醇等脂质、蛋白等的含量不同，各自在体内显示不同的作用。

TRL是甘油三酯的含量多的脂蛋白的总称，包含乳糜微粒、VLDL、它们的中间代谢产物、残粒(レムナント)样脂蛋白(RLP)，有时也进一步地包含IDL。

一直以来已知LDL、RLP与动脉硬化性疾病的相关性，主要在欧美报告了包含IDL的TRL与动脉硬化性疾病的进展更加深入地相关，其受到关注。

迄今为止已知的TRL的测定法存在超速离心法、NMR法等。超速离心是通过离心利用脂蛋白的密度差分级的方法，存在需要操作熟练、花费时日、此外费用也变高的缺点。NMR法是通过核磁共振测量脂蛋白的粒子数的方法，需要特殊的机器，不具一般性。

TRL-C的其它测定方法可举出计算法。由于TRL也可称为LDL、HDL以外的脂蛋白，因此从总胆固醇值中减去LDL-C和HDL-C而求得。作为LDL-C的测定法，美国疾病管理中心的β-定量法(β-Quantification法，BQ法)成为国际基准法，该方法将密度1.006-1.063g/cm³的脂蛋白作为LDL，因此BQ法的LDL-C中包含IDL-C。因此，在通过计算求得TRL-C时，在应用由BQ法测定的LDL-C的情况下，IDL-C也作为LDL-C被减去。以BQ法为基准开发的其它LDL-C测定法、例如应用Friedewald公式等的情况也同样。在应用这些LDL-C的测定方法的情况下，算出的TRL-C中不含IDL-C，称不上测定所谓的临床意义更高的包含IDL的TRL。

因此，需要简便且正确地定量包含IDL的TRL-C的方法以及试剂的发明。

下文在仅仅记载TRL、TRL-C的情况下，各自意味着包含IDL的TRL、包含IDL-C的TRL-C。

另外，专利文献1-3报告了作为TRL-C的一部分的RLP-C的测定方法。它们都是可通过通用自动分析装置测定的方法，但仅测定RLP，与测定全体TRL的本发明不同。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：专利4456715号公报

专利文献2：专利5027648号公报

专利文献3：专利5766426号公报。

发明概述

发明要解决的课题

本发明的目的是，提供不需要繁杂的操作、更特异性地定量被检试样中的TRL-C的方法以及试剂。

用于解决课题的手段

本申请发明人进行深入研究，结果发现，通过在表面活性剂存在下、使分子量超过50kDa的胆固醇酯酶作用于包含各种脂蛋白的被检体试样，TRL以外的脂蛋白特异性地产生反应。通过利用这一知识，想到可以不进行分离操作、简便且正确地定量TRL-C，并完成本发明。