[发明专利]用于缺血患者的诊断和风险分层的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及基于糖基化Apo J水平检测的用于诊断缺血或缺血性组织损伤的方法，用于在已患有缺血事件的患者中预测缺血的进展、用于确定已患有缺血事件的患者的预后以及用于确定患有稳定型冠脉疾病的患者患复发性缺血事件之风险的方法。本发明还涉及用于测定样品中糖基化Apo J的方法。

技术领域

本发明涉及用于患有心肌缺血或脑缺血或与其相关的组织缺血性损伤的个体的预后、诊断和危险分层以及用于呈现患有稳定型冠状动脉疾病(coronary arterydisease，CAD)的个体中的复发性缺血事件的生物标志物。

背景技术

急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome，ACS)和脑血管事件是动脉粥样硬化血栓形成最常见的临床表现，并且代表全世界死亡和残疾的主要原因。由于早期血运重建(revascularization)的重要性以及死亡的高风险和/或生活质量的下降，早期诊断至关重要。在这种背景下，生物标志物作为重要工具出现以补充用于患有疑似ACS之患者的诊断、检别分类(triage)、风险分层和管理的临床评估，以及区分缺血性卒中与出血性卒中。这些生物标志物应提供病理过程信息并代表更复杂和昂贵的诊断技术(如磁共振等)的替代选择。

事实上，由于非心脏问题与心脏缺血事件具有相似的症状(由于呼吸或肌肉病例状况引起的疼痛)，急诊室的入院百分率很高。在脑血管疾病的情况下，迫切需要具有出血性卒中与缺血性卒中的辨别物，从而可相应地且迅速地启动患者管理。

因此，对于用于缺血的早期、特异性和灵敏性检测的新生物标志物的鉴定存在未满足的需求。到目前为止，已经研究了炎症、心脏功能和坏死的标志物。然而，尚不清楚它们的测量是否可用于缺血综合征的诊断和预后。缺血性器官损伤通常先于组织坏死，并且如果及时检测到，则可逆转。用于准确且早期检测缺血的现有标志物的这种缺乏导致世界范围内提高的不必要的经济成本。

如今，急性冠脉综合征(ACS)的诊断和管理是基于临床评估、心电图检查结果和肌钙蛋白水平(唯一一组公认的生物标志物)。该方案的应用带来一些限制，这些限制使得寻找用于管理心肌缺血患者的新生物标志物是必不可少的。第一个缺点是心脏肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)是不可逆坏死(细胞死亡)(心肌损伤的晚期阶段)的标志物。此外，高灵敏度cTn测定(hs-cTn)已显示出一定的非特异性。另外，目前的指南强调需要进行连续hs-cTn测量以对急性胸痛患者进行适当的检别分类。

基于载脂蛋白J(apolipoprotien，Apo J)的同种型分布谱变化的用于检测缺血性组织损伤的方法已在出版物WO2011098645以及在Cubedo，J.，等(J.Proteome Res.，2011，10：211-220)中描述。在那些研究中，通过双向电泳随后通过质谱法鉴定两组不同的Apo J同种型Apo J-15和Apo J-29。这些Apo J形式与组织损伤有关，并且特别是与由AMI引起的心脏损伤有关。在缺血性损伤中，及时并准确地检测缺血事件是至关重要的，以防止其可导致不可逆的组织损伤的进展。在这种情况下，基于双向电泳和随后的质谱法用于确定Apo J分布谱变化的方法不能用于临床实践，因为它们太复杂、冗长且昂贵而无法用于缺血的诊断。

因此，本领域中需要用于检测血管损伤和特别是AMI的改进方法。

发明概述

在第一方面，本发明涉及用于在对象中诊断缺血或缺血性组织损伤的方法，其包括在所述对象的样品中确定含有N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)残基的糖基化Apo J的水平或含有N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和唾液酸残基的Apo J糖基化的水平，或用于在对象中诊断缺血或缺血性组织损伤的方法，其包括在所述对象的样品中确定能够与曼陀罗(Daturastramonium)凝集素特异性结合的糖基化Apo J的水平或能够与栽培小麦(Triticumvulgaris)凝集素特异性结合的糖基化Apo J的水平。