[发明专利]B细胞基因组编辑的组合物和方法在审
| 申请号： | 201780028341.1 | 申请日： | 2017-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN109072193A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 迈克尔·戈德堡;薇拉·葛雷纳 | 申请（专利权）人： | 达纳-法伯癌症研究所有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0781 | 分类号： | C12N5/0781;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京律盟知识产权代理有限责任公司 11287 | 代理人： | 陈甜甜 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 目标治疗 同种异体 基因组 自体 分泌 制备 | ||
1.一种增加培养物中原代人B细胞群存活率的方法，其包含在包含细胞凋亡抑制剂的培养基中培养所述B细胞群。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述细胞凋亡抑制剂是半胱天冬酶抑制剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述半胱天冬酶抑制剂是Q-VD-OPH。
4.根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中，与不使用细胞凋亡抑制剂培养的B细胞群相比，所述细胞群的存活率增加了至少10％。
5.一种编辑原代人B细胞群的基因组的方法，其包含：
(a)获得原代人B细胞群；
(b)在包含一或多种活化剂和一或多种细胞凋亡抑制剂的培养基中培养所述原代人B细胞群；以及
(c)通过插入或删除目的基因来基因组修饰所述原代人B细胞群，以产生基因组编辑的B细胞群。
6.根据权利要求5所述的方法，其进一步包含用同源定向修复HDR模板转染所述细胞。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，使用核酸酶完成所述基因组修饰。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述核酸酶是CRISPR核酸酶、锌指核酸酶或转录激活因子样效应物核酸酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述CRISPR核酸酶是Cas核酸酶、Cpf1核酸酶、Cmr核酸酶、Csf核酸酶、Csm核酸酶、Csn核酸酶、Csy核酸酶、C2c1核酸酶、C2c3核酸酶或C2c3核酸酶。
10.根据权利要求5所述的方法，其中，通过用Cas9蛋白和序列对所述目的基因具有特异性的sgRNA转染所述B细胞群来完成所述基因组修饰。
11.根据权利要求5所述的方法，其中，所述目的基因是免疫球蛋白基因座。
12.根据权利要求5所述的方法，其中，所述活化剂是细胞因子。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述细胞因子是IL-4。
14.根据权利要求12所述的方法，其进一步包含用CD40激动剂培养所述B细胞。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述CD40激动剂是CD40L。
16.根据权利要求5所述的方法，其中，所述细胞凋亡抑制剂是半胱天冬酶抑制剂。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述半胱天冬酶抑制剂是Q-VD-OPH。
18.根据权利要求5所述的方法，其进一步包含用细胞因子重新活化所述基因组编辑的B细胞群。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述细胞因子是IL-4。
20.根据权利要求18所述的方法，其进一步包含用CD40激动剂培养所述B细胞。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述CD40激动剂是CD40L。
22.根据权利要求5所述的方法，其中，所述获得的原代人B细胞群包含至少1×106个B细胞。
23.一种基因组编辑的B细胞群，其是通过根据权利要求5所述的方法产生。
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