[发明专利]治疗在GLA基因中具有G9331A突变的患者的法布里病的方法

说明书

提供了治疗诊断患有法布里病的患者的方法和在诊断患有或疑似患有法布里病的患者中增强α‑半乳糖苷酶A的方法。某些方法包括向患者给予治疗有效剂量的α‑半乳糖苷酶A的药理学伴侣，其中该患者在编码α‑半乳糖苷酶A的核酸序列的内含子4中具有剪接位点突变。还描述了药理学伴侣用于治疗法布里病的用途和用于治疗法布里病的组合物。

技术领域

本发明的原理和实施例总体上涉及药理学伴侣用于治疗法布里病的用途，特别是在GLA基因的内含子4中具有剪接位点突变的患者中。

背景技术

许多人类疾病由导致蛋白质氨基酸序列变化的突变引起，这些变化降低蛋白质稳定性并可阻止其正确折叠。蛋白质通常在称为内质网或ER的细胞的特定区域折叠。细胞具有质量控制机制，其确保蛋白质在它们可以从ER移动到细胞中的合适目的地之前被折叠成它们正确的三维形状，这一过程通常被称为蛋白质运输。错误折叠的蛋白质通常在最初保留在ER中后通过质量控制机制消除。在某些情况下，错误折叠的蛋白质可以在被消除之前累积在ER中。错误折叠的蛋白质在ER中的保留打断了它们的正确运输，并且所得的降低的生物活性可导致细胞功能受损并最终导致疾病。另外，错误折叠的蛋白质在ER中的积累可能导致对细胞的各种类型的压力，这也可能有助于细胞的功能障碍和疾病。

导致产生不太稳定或错误折叠的蛋白质的大多数遗传突变被称为错义突变。这些突变导致蛋白质中单个氨基酸被另一个氨基酸取代。然而，除了错义突变之外，还存在可导致具有降低的生物活性的蛋白质的其他类型的突变。可引起疾病的另一种类型的突变是剪接位点突变。剪接位点突变是如下突变，其中在内含子剪接发生位点处有核苷酸的插入、缺失或数量改变。这种突变可导致mRNA前体的不正确加工，包括在隐蔽剪接点处的外显子跳跃或剪接，导致总的结构和功能改变。

此类突变可导致溶酶体贮积病(LSD)，其特征在于由于编码溶酶体酶的基因突变导致的溶酶体酶的缺陷。这导致那些酶的底物的病理积累，这些底物包括脂质、碳水化合物和多糖。尽管有与每个LSD相关的许多不同的突变基因型，但是许多突变是错义突变，其可导致产生较不稳定的酶。这些较不稳定的酶有时通过ER相关的降解途径过早降解。这导致溶酶体中的酶缺陷以及底物的病理积累。此类突变酶有时在相关领域中被称为“折叠突变体”或“构象突变体”。

法布里病是由编码α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)的GLA基因的突变引起的LSD。突变导致底物球形三酰神经酰胺(Gb3，GL-3或神经酰胺三己糖苷)积累在各种组织和器官中。患有法布里病的男性是半合子，因为这些疾病基因在X染色体上编码。法布里病估计会影响40,000和60,000名男性中的1名，并且女性发生率较低。已经有几种治疗法布里病的途径。

用于治疗法布里病的一种批准的疗法是酶替代疗法(ERT)，其典型地涉及静脉内输注纯化形式的相应野生型蛋白质(基因酶公司(Genzyme Corp.))。酶替代疗法的主要难题之一是达到并维持治疗有效量的体内蛋白，这归因于输注的蛋白的快速降解。目前克服这个问题的方法是执行许多昂贵的高剂量输注。ERT还有一些额外的警告，例如大量生成、纯化和存储正确折叠蛋白质的困难；获得糖基化天然蛋白；产生抗蛋白免疫应答；并且蛋白质不能穿过血脑屏障缓解中枢神经系统病理(即，低生物利用度)。此外，替代酶不能以足够的量渗透心脏或肾脏，以减少肾足细胞或心肌细胞中的底物积累，这在法布里病理学中表现突出。

使用含有编码功能性蛋白质的核酸序列的重组载体或使用表达功能性蛋白质的遗传修饰的人细胞进行的基因疗法也正在开发中，以治疗从蛋白质替代中受益的蛋白质缺陷症和其他病症。

治疗一些酶缺陷的第三种途径涉及使用小分子抑制剂来减少缺陷酶蛋白质的天然底物的产生，从而改善病理学。这种“底物还原”途径已被具体描述，其针对一类约40种相关的酶障碍，称为溶酶体贮积病，包括鞘糖脂贮积病。提出用作治疗的小分子抑制剂特异性地抑制参与糖脂合成的酶，减少需要由缺陷酶分解的细胞糖脂的量。