[发明专利]用于生产分泌蛋白质的哺乳动物细胞

权利要求书

1.一种具有重组治疗蛋白质的增强分泌的哺乳动物细胞，其包括(a)宿主细胞蛋白质TBC1结构域家族成员20(TBC1D20)和神经酰胺合酶2(CERS2)的降低表达；或(b)宿主细胞蛋白质激活转录因子6β(ATF6B)的降低表达，其中所述哺乳动物细胞进一步包含编码重组分泌性治疗蛋白质的一个或多个表达盒，其中(a)编码所述宿主细胞蛋白质的基因包含抑制所述宿主细胞蛋白质表达的遗传修饰，或(b)所述哺乳动物细胞包含通过RNA干扰抑制编码所述宿主细胞蛋白质的基因表达的RNA寡核苷酸，和其中与不含有所述遗传修饰或RNA寡核苷酸的相同哺乳动物细胞相比，所述哺乳动物细胞中TBC1D20和CERS2的蛋白质表达或ATF6B的蛋白质表达降低。

2.一种具有重组治疗蛋白质的增强分泌的哺乳动物细胞，其包括宿主细胞蛋白质TBC1D20和CERS2的降低表达，其中(a)编码所述宿主细胞蛋白质的基因包含抑制所述宿主细胞蛋白质表达的遗传修饰，或(b)所述哺乳动物细胞包含通过RNA干扰抑制编码所述宿主细胞蛋白质的基因表达的RNA寡核苷酸，和其中与不含有所述遗传修饰或RNA寡核苷酸的相同哺乳动物细胞相比，所述哺乳动物细胞中TBC1D20和CERS2的蛋白质表达降低，其中所述哺乳动物细胞进一步包含编码重组分泌性治疗蛋白质的一个或多个表达盒。

3.一种产生具有重组治疗蛋白质的增强分泌的哺乳动物细胞的非治疗方法，其包括：(a)通过以下降低所述哺乳动物细胞中宿主细胞蛋白质TBC1D20和CERS2或宿主细胞蛋白质ATF6B的表达：(i)将遗传修饰引入编码所述宿主细胞蛋白质的基因内，所述遗传修饰抑制所述宿主细胞蛋白质的表达，或(ii)将RNA寡核苷酸引入所述哺乳动物细胞内，所述RNA寡核苷酸通过RNA干扰抑制编码所述宿主细胞蛋白质的基因的表达，和(b)引入编码重组分泌性治疗蛋白质的一种或多种基因，其中与不含有所述遗传修饰或RNA寡核苷酸的相同哺乳动物细胞相比，所述哺乳动物细胞中TBC1D20和CERS2的蛋白质表达或ATF6B的蛋白质表达降低。

4.权利要求3的方法，其进一步包括下述步骤：(c)选择具有重组治疗蛋白质的增强分泌的细胞；和(d)任选地在允许编码重组分泌性治疗蛋白质的一种或多种基因表达的条件下，培养步骤(c)中获得的所述细胞。

5.权利要求1至2中任一项的哺乳动物细胞或权利要求3至4中任一项的方法，其中所述RNA干扰由短发夹RNA(shRNA)或小干扰RNA(siRNA)介导。

6.权利要求5的哺乳动物细胞或方法，其中所述哺乳动物细胞用一种或多种表达载体转染，所述表达载体包含编码所述siRNA或shRNA的核苷酸序列，并且任选地其中所述哺乳动物细胞用一种或多种表达载体稳定转染，所述表达载体包含编码所述siRNA或shRNA的核苷酸序列。

7.权利要求5的哺乳动物细胞或方法，其中(i)所述siRNA是(a)如SEQ ID NO：7所示的siTbc1D20#1、或如SEQ ID NO：8所示的siCerS2#1、或其组合；或(b)如SEQ ID NO：9所示的siAtf6b#1、如SEQ ID NO：10所示的siAtf6b#2和如SEQ ID NO：11所示的siAtf6b#3中的一种或多种；或(ii)所述shRNA包含(a)如SEQ ID NO：12所示的shTbc1D20#1、或如SEQ ID NO：13所示的shCerS2#1和如SEQ ID NO：14所示的shCerS2#2中的一种或多种、或其组合；或(b)如SEQ ID NO：15所示的shAtf6b#1和如SEQ ID NO：37所示的shAtf6b#2中的一种或多种。

8.权利要求1-2中任一项的哺乳动物细胞或权利要求3至4中任一项的方法，其中编码所述宿主细胞蛋白质TBC1D20和CERS2或ATF6B的基因中的遗传修饰独立地是(a)基因缺失；或(b)基因中的突变，其抑制所述宿主细胞蛋白质表达。