[发明专利]链霉亲和素突变蛋白及其使用方法

权利要求书

1.一种链霉亲和素突变蛋白，其中，所述突变蛋白

(a) 在参照如SEQ ID NO: 1所示的野生型链霉亲和素的氨基酸序列的序列位置127处具有Cys残基；

(b) 其中，所述突变蛋白包含如SEQ ID NO: 16所示的突变蛋白m1-9C的序列；和

(c) 其中，所述突变蛋白为最小链霉亲和素的突变蛋白，所述最小链霉亲和素N-端起始于野生型链霉亲和素的氨基酸10至16的区域中，C-端终止于野生型链霉亲和素的氨基酸133-142的区域中。

2.根据权利要求1所述的突变蛋白，其中，所述突变蛋白由如SEQ ID NO: 16所示的突变蛋白m1-9C的序列组成。

3.一种核酸分子，其编码如权利要求1至2中任一项所述的链霉亲和素突变蛋白。

4.一种载体，其包含在可操作地功能性环境中的至少一个拷贝的如权利要求3所述的核酸分子。

5.一种细胞，其由如权利要求4所述的载体转化或转染。

6.一种产生如权利要求1至2中任一项所述的链霉亲和素突变蛋白的方法，所述方法包括：

(a) 用包含编码所述链霉亲和素突变蛋白的核酸的载体转化合适的宿主细胞；

(b) 在其中发生所述链霉亲和素突变蛋白的表达的条件下培养所述宿主细胞；

(c) 分离所述突变蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤(c)包括裂解所述宿主细胞，以包涵体的形式分离所述链霉亲和素突变蛋白，并使所述链霉亲和素突变蛋白复性。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤(b)中的所述表达包括表达携带信号肽的链霉亲和素突变蛋白，和所述链霉亲和素突变蛋白分泌到所述宿主细胞的周质或培养基中。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌。

10.一种在变性条件下分离、纯化或测定蛋白的方法，所述蛋白与以下肽序列融合：a)式Trp-Xaa-His-Pro-Gln-Phe-Yaa-Zaa的肽序列，其中Xaa代表任意氨基酸，Yaa和Zaa均表示Gly，或者Yaa表示Glu而Zaa表示Arg或Lys，或b) 包含至少两个链霉亲和素结合模块的顺序排列的肽序列，其中所述两个模块之间的距离为至少0个且不大于50个氨基酸，其中一个结合模块具有3至8个氨基酸并至少包含序列-His-Pro-Baa-，其中Baa是谷氨酰胺、天冬酰胺或蛋氨酸，并且其中另一个结合模块具有序列-Oaa-Xaa-His-Pro-Gln-Phe-Yaa-Zaa-，其中Oaa为Trp、Lys或Arg，Xaa为任意氨基酸，其中Yaa和Zaa均为Gly，或者Yaa为Glu而Zaa为Lys或Arg，

所述方法包括在合适的条件下，使包含所述蛋白的样品与权利要求1至2中任一项所述的链霉亲和素突变蛋白接触，以使所述肽序列结合于所述链霉亲和素突变蛋白，和从所述样品中分离得到的复合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述链霉亲和素突变蛋白被结合于固相或能够结合于固相。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，为了从所述复合物中释放融合蛋白，将所述复合物与足够量的对于所述链霉亲和素突变蛋白的配体一起温育，所述配体选自生物素及其衍生物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述生物素衍生物为硫代生物素。