[发明专利]可用于纳米孔系统的位点特异性生物缀合方法和组合物

权利要求书

1.包含结构式(IVa)的修饰的孔形成蛋白的组合物

其中，

S是所述孔形成蛋白的硫醇基团的硫原子；

A是硫醇反应性基团；

L_A是接头；且

X是点击化学反应性基团；

Y是点击化学反应性基团，其经历与反应性基团X的点击化学反应；

L_B是接头；且

B是反应性基团，

其中式(IVa)的修饰的孔形成蛋白包含选自式(IVb)、(IVc)、(IVd)、(IVe)、(IVf)和(IVg)的化合物的化合物：

，

且其中反应性基团B包含SpyTag肽。

2.包含式(V)的蛋白和生物分子的缀合物的组合物

其中，

S是所述蛋白的硫醇基团的硫原子；

A是硫醇反应性基团；

L_A是接头；且

X是点击化学反应性基团；

Y是点击化学反应性基团，其经历与反应性基团X的点击化学反应；

L_B是接头；

B是反应性基团；

且

Z是能够与反应性基团B形成共价键的反应性基团，

其中所述点击化学反应性基团X和Y是选自以下对点击化学反应性基团的对：叠氮化物和炔烃；叠氮化物和环辛炔；以及叠氮化物和二苯并环辛炔-胺，

其中所述硫醇反应性基团A是马来酰亚胺，

其中式(V)的缀合物包含选自式(Vb)、(Vc)、(Vd)、(Ve)、(Vf)和(Vg)的化合物的化合物：

，

其中反应性基团B包含SpyTag肽，且反应性基团Z包含SpyCatcher蛋白，

其中所述蛋白是嵌入膜中的孔形成蛋白，且

其中所述生物分子是能够催化聚合物合成的酶，其任选地选自DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆转录酶和DNA连接酶。

3.权利要求2的组合物，其中所述SpyTag肽和SpyCatcher蛋白各自包含来自酿脓链球菌纤连蛋白结合蛋白FbaB的CnaB2结构域的氨基酸序列的片段。

4.权利要求2-3中任一项的组合物，其中所述蛋白是孔形成蛋白，其任选地选自α-溶血素、β-溶血素、γ-溶血素、气单胞菌溶素、溶细胞素、杀白细胞素、蜂毒肽、MspA孔蛋白和孔蛋白A。