[发明专利]细胞培养基、培养方法以及类器官有效

专利信息
申请号: 201780011546.9 申请日: 2017-02-17
公开(公告)号: CN109072179B 公开(公告)日: 2022-04-01
发明(设计)人: 佐藤俊朗;股野麻未;杉本真也;髙木淳一 申请(专利权)人: 学校法人庆应义塾;国立大学法人大阪大学
主分类号: C12N5/00 分类号: C12N5/00;C12N5/0775;C12N5/09;C12N5/10
代理公司: 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 代理人: 王达佐;洪欣
地址: 日本*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 细胞 培养基 培养 方法 以及 器官
【权利要求书】:

1.一种细胞培养基,其特征在于,

所述细胞培养基是无血清培养基,其包含:

Wnt激动剂,其含有Wnt蛋白质与其稳定物质Afamin形成的复合物和R-脊椎蛋白(R-spondin);以及

选自于由促分裂生长因子、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)抑制剂、转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)抑制剂以及p38抑制剂所构成的组中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的细胞培养基,其中,所述Wnt蛋白质是选自于由Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11以及Wnt16所构成的组中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的细胞培养基,其中,所述R-脊椎蛋白是选自于由R-脊椎蛋白1、R-脊椎蛋白2、R-脊椎蛋白3、以及R-脊椎蛋白4构成的组中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的细胞培养基,其中,所述促分裂生长因子是上皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)。

5.根据权利要求1或2所述的细胞培养基,其中,所述BMP抑制剂是头蛋白(Noggin)。

6.根据权利要求1或2所述的细胞培养基,其中,所述TGF-β抑制剂是A83-01。

7.一种上皮干细胞、上皮癌细胞或包含这些细胞中的至少任一种细胞的组织的培养方法,其特征在于,包括:

细胞外基质制备工序,制备细胞外基质;

粘附工序,将上皮干细胞、上皮癌细胞或包含这些细胞中的至少任一种细胞的组织在所述细胞外基质上进行粘附;以及

类器官形成工序,在所述粘附工序之后添加权利要求1至6中任一项所述的细胞培养基,培养所述上皮干细胞、所述上皮癌细胞或包含所述这些细胞中的至少任一种细胞的组织,形成类器官。

8.一种上皮干细胞或包含上皮干细胞的组织的培养方法,其特征在于,包括:

细胞外基质制备工序,制备细胞外基质;

粘附工序,将上皮干细胞或包含上皮干细胞的组织在所述细胞外基质上进行粘附;以及

类器官形成工序,在所述粘附工序之后添加权利要求1或2所述的细胞培养基,培养所述上皮干细胞或包含所述上皮干细胞的组织,形成类器官。

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