[发明专利]用于控制蚂蚁的方法和组合物

说明书

本发明描述了用于产生适于控制蚂蚁物种增殖的RNA的重组序列和方法，所述蚂蚁物种包括火蚁、弓背蚁、阿根廷蚁、酸臭蚁、铺道蚁和小家蚁属。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年2月2日提交的美国临时申请号62/290,318和2016年9月21日提交的美国临时申请号62/397,790的权益。

序列表的引入

在此将序列表提供为2017年1月31日创建的标题为“用于控制蚂蚁的方法和组合物_ST25.txt”的文本文件，其大小为52KB。文本文件的内容全文以引用的方式并入本文。

技术领域

本发明包括用于RNA介导的基因抑制的方法和组合物来作为一般控制蚂蚁并特别是红火蚁(火蚁)、宾夕法尼亚弓背蚁和佛罗里达弓背蚁(木蚁)、阿根廷蚁(阿根廷蚂蚁)、酸臭蚁(有气味的蚂蚁)、铺道蚁(路面蚂蚁)和小家蚁(法老蚁)的方式。所述方法和组合物可适用于控制这种蚂蚁的增殖，而不会对相关昆虫、植物或动物物种造成相应影响。

背景技术

最初在秀丽隐杆线虫中描述的RNA介导的基因抑制(RNAi)已被证明是用于调节许多其它生物中的基因表达的有效方法(Fire等人，《双链RNA在秀丽隐杆线虫中的有效且特定的基因干扰(Potent and specific genetic interference by double-stranded RNAin Caenorhabditis elegans)》，《自然(Nature)》，第391期，第806页(1998年))。许多研究小组已经使用双链RNA(dsRNA)证实RNAi在控制影响作物的昆虫的增殖方面的可行性(综述于Ivashuta等人，《食草昆虫中的环境RNAi(Environmental RNAi in herbivorousinsects)》，《RNA》，第21期，第840页(2015年)中)。用于现有技术中描述的RNAi目的的重组RNA构建体一般由具有约18到约25个碱基对的dsRNA组成，但也包括通常在约100到约1,000个碱基对(bp)之间的较长dsRNA。为了成功地将dsRNA引入昆虫体内，当在昆虫饮食中进行供应时，需要长于或等于约60个bp的dsRNA才能进行有效摄取(Bolognesi等人，《在西方玉米根虫幼虫肠细胞(西方玉米根叶甲)中由Snf7RNAi引起的超微结构变化(Ultrastructural Changes Caused by Snf7RNAi in Larval Enterocytes of WesternCorn Rootworm(Diabrotica virgifera virgifera Le Conte)，《公共科学图书馆·综合(PLoS One)》，第7期，第e47534页(2012年))。通过宿主Dicer酶复合物在体内将长的dsRNA分子切分裂成多种多样的siRNA种群。或者，RNAi基因抑制也可经由相关过程通过针对特定序列的反义RNA的动作发生。用于控制田间昆虫的RNAi方法的实际应用受到体外RNA合成的成本和RNA对环境和酶促降解的化学脆性的限制。

毒素和成像剂的噬菌体MS2衣壳介导的递送已被证明是在体外将这种试剂递送到真核细胞的有效方法(Ashley等人，《通过噬菌体MS2病毒样颗粒对多种多样的货物的特定于细胞的递送(Cell-specific delivery of diverse cargos by bacteriophageMS2virus-like particles)》，《美国化学学会纳米(ACS Nano)》，第5期，第5729页(2011年))。尚不清楚这种噬菌体衣壳是否可能起向田间昆虫递送RNAi前体的类似功能的作用。将RNAi前体有效地递送到靶标昆虫体内需要防止非特异性RNA降解、简易施用途径、以及在靶标昆虫体内的适当位点处释放RNAi前体以使得RNAi前体可被昆虫细胞摄取并适当地加工的能力。理想地，RNAi前体和递送系统必须在生产和分配方面是经济且相对简单的。在此所述的发明满足所有这些标准，并且还附加了允许快速发现、原型制作和对新的RNAi分子的商业规模生产的益处。