[发明专利]DNA折纸单元分步组装法

权利要求书

1.一种将核酸折纸单元分步组装核酸纳米结构的方法，包括如下步骤：

1)根据预构成的核酸纳米结构制备用于如下步骤2)和步骤3)中的第1步目标核酸折纸单元组至第m步目标核酸折纸单元组，m为大于等于2的整数；

每步目标核酸折纸单元组由1个或多个目标核酸折纸单元组成；

所述每步目标核酸折纸单元组中的每个目标核酸折纸单元的两端均带有粘性末端，且所述每步目标核酸折纸单元组中的每个目标核酸折纸单元的粘性末端均不互补；

所述每步目标核酸折纸单元组中的每个目标核酸折纸单元一端的粘性末端与下一步目标核酸折纸单元组中的对应的目标核酸折纸单元对应端的粘性末端互补；另一端的粘性末端与上一步目标核酸折纸单元组中的对应的目标核酸折纸单元对应端的粘性末端互补；

2)将步骤1)得到的每步目标核酸折纸单元组分步连接固定在连接有连接链的固定相上，得到连接有连接链的核酸纳米结构；

所述分步连接固定包括如下步骤：

A、将所述第一步目标核酸折纸单元组加入含有连接有连接链的固定相的体系中，连接固定反应，得到含有第1连接产物体系；

所述含有连接有连接链的固定相的体系由连接有连接链的固定相和自组装反应缓冲液组成；

B、将第2步目标核酸折纸单元组加入含有第1连接产物体系中，连接固定反应，得到含有第2连接产物体系；

依次类推；

C、将所述第m步连接的目标核酸折纸单元组加入含有第m-1连接产物体系中，连接固定反应，得到含有第m连接产物，即为含有连接有连接链的核酸纳米结构体系；

所述第1步目标核酸折纸单元组中的一个目标折纸单元的另一端粘性末端与所述连接链互补；

3)向步骤2)得到的连接有连接链的核酸纳米结构中添加与所述连接链完全互补的分离链进行分离反应，得到核酸纳米结构。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步骤2)中，所述连接有连接链的固定相为固定有连接链的磁珠、固定有连接链的硅面、固定有连接链的玻璃面或其他固定有连接链的固定面；

所述连接链为13-80nt的单链核酸分子，且其5’端6-50nt的碱基与所述第1个目标核酸折纸单元的另一端粘性末端互补；所述连接链3’端标记生物素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤2)中，所述固定有连接链的磁珠为将所述连接链与标记链霉素的磁珠在自组装缓冲液中进行亲和反应，得到含有连接有连接链的固定相的体系；

步骤3)中，所述向步骤2)得到的连接有连接链的核酸纳米结构中添加与所述连接链完全互补的分离链进行分离反应为：将所述分离链添加到所述含有连接有连接链的核酸纳米结构体系，进行分离反应。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

所述标记链霉素的磁珠浓度为10mg/mL，所述磁珠的加入量为10-500uL；

或所述连接链在所述亲和反应所在体系中的浓度为10nM-100uM；

或所述亲和反应所在体系由连接链、标记链霉素和自组装缓冲液组成；

或每个所述目标核酸折纸单元结构在其连接固定所在体系中的浓度为1-1000nM；

或所述连接链和与其互补连接的目标核酸折纸单元的物质的量比为5:1-1000：1；

或所述分离链在分离反应所在的体系中的浓度为10nM-100uM。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述连接链在所述亲和反应所在体系中的浓度为5uM；

或每个所述目标核酸折纸单元结构在其连接固定所在体系中的浓度为10nM；

或所述连接链和与其互补连接的目标核酸折纸单元的物质的量比为500:1；

或所述分离链在分离反应所在的体系中的浓度为5uM。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

每一次分步连接固定前都包括如下步骤：去除上一步分步连接固定反应体系中的游离目标核酸折纸单元；

或所述粘性末端的大小为6-50nt。