[发明专利]一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶2有效
| 申请号： | 201780001727.3 | 申请日： | 2017-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN107980060B | 公开（公告）日： | 2021-05-25 |
| 发明（设计）人： | 傅荣昭;刘立辉;曹磊;刘滔滔;彭亭 | 申请（专利权）人： | 深圳市邦泰绿色生物合成研究院 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12P33/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518102 广东省深圳市宝安区西乡街道桃*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羟基 胆烷酸 制备 方法 及其 | ||
1.一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法，其特征在于：以鹅去氧胆酸为底物，在NAD、乳酸脱氢酶、丙酮酸钠以及缓冲溶液存在的条件下，用7α-类固醇脱氢酶催化鹅去氧胆酸制备3α-羟基-7氧代-5β胆烷酸，所述乳酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，在整个催化反应体系中，所述底物的浓度为50～100mg/mL，所述NAD的浓度为0.01～0.25mg/mL，所述丙酮酸钠的浓度为10～30mg/mL，所述7α-类固醇脱氢酶为在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的基础上进行下述突变：D42N+N44A、G97D+G99A、L117E、Y159F或I192K+D195N后所获得的突变体。
2.根据权利要求1所述的3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法，其特征在于：控制所述催化过程在温度为25～35℃，pH值为7.5～8.5的条件下进行。
3.根据权利要求1所述的3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法，其特征在于：所述缓冲溶液为50～100mM磷酸钾缓冲液。
4.根据权利要求1所述的3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括如下提纯步骤：待所述催化过程反应结束后，调节pH值为1.0～2.0，搅拌20～30min，待冷却后再经过滤水洗干燥后即得3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸成品。
5.一种7α-类固醇脱氢酶，其特征在于：用于催化鹅去氧胆酸制备3α-羟基-7氧代-5β胆烷酸，所述7α-类固醇脱氢酶为在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的基础上进行下述突变：D42N+N44A、G97D+G99A、L117E、Y159F或I192K+D195N后所获得的突变体。
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