[实用新型]胱抑素C时间分辨检测卡及试剂盒

说明书

(一)技术领域

本实用新型涉及一种胱抑素C时间分辨荧光检测卡及试剂盒。

(二)背景技术

胱抑素C(cystatin c)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的内源性标志物，并在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度由肾小球滤过决定，而不依赖任何外来因素，如性别、年龄、饮食的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想同源性标志物。

正常情况下，CysC在血清和血浆中的浓度为0.51-1.09mg/L(参考范围)。当肾功能受损时，CysC在血液中的浓度随肾小球滤过率变化而变化。肾衰时，肾小球滤过率下降，CysC在血液中浓度可增加10多倍；若肾小球滤过率正常，而肾小管功能失常时，会阻碍CysC在肾小管吸收并迅速分解，使尿中的浓度增加100多倍。研究资料已表明，CysC是较血清BUN、Cr有更高的敏感性和特异性，对于评价肾小球滤过率有非常重要的价值，CysC是迄今基本满足理想内源性GFR标志物要求的内源性物质。是新近发展起来的评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。

现有技术中测定胱抑素C的方法主要有免疫比浊法、荧光免疫层析法、胶体金法等。其中胶体金法具有操作简单快速的优点，但灵敏度低且定量不准确；免疫比浊法较为敏感、准确，可应用于全自动生化仪，但需要仪器且耗时较长，适合处理大量样本，无法满足快速检测的目的；免疫荧光法是将胱抑素C抗体共价结合于荧光微球表面活性基团上，通过激发后检测线是否产生荧光来判断结果，快速便捷可准确定量同时具有高灵敏度、标记物稳定等优点，在医学免疫检测领域广泛应用。

然而在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光，因此使用传统的荧光素等发色团进行荧光检测时灵敏度就会严重下降，但大部分背景荧光信号是短时存在的，可利用稀土荧光微球(镧系元素螯合物)作为标记物来标记抗体或抗原。因镧系元素螯合物stoke位移大很容易分辨激发光和发射光，从而排除激发光干扰，且衰变时间长可通过时间分辨消除本底荧光干扰，另外镧系元素螯合物激发光谱宽而发射光谱窄可进一步提高灵敏度和降低本底荧光。因此采用时间分辨荧光免疫技术，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。

(三)发明内容

本实用新型目的是提供一种利用时间分辨荧光免疫层析技术的灵敏性，结合干式免疫荧光分析仪实现高灵敏度、可准确定量、简便快捷的胱抑素C时间分辨荧光免疫层析定量检测卡以及试剂盒。

本实用新型采用的技术方案是：

一种胱抑素C时间分辨荧光检测卡，包括卡壳和设置在卡壳内的检测试纸条：

所述检测试纸条由底衬以及粘贴在底衬上的玻璃纤维样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成，所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸顺次搭接粘贴在底衬上；

所述样品垫设置有微球线，喷涂有时间分辨荧光微球标记的胱抑素C单克隆抗体CysC1(含量为50～200μg抗体/200μl荧光微球)，所述时间分辨荧光微球掺杂稀土铕元素(固含量为1％，w/w)，粒径为100nm～300nm；所述时间分辨荧光微球在基态下稳定，在350～380nm的激发光源作用下发射出波长范围在600～620nm的荧光；

所述硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线和质控线相互平行，间隔距离为3～5mm，其中检测线靠近样品垫，质控线远离样品垫；检测线中胱抑素C单克隆抗体CysC2包被浓度为0.3～2mg/ml、用量为0.5～1.5μl包被液量/cm膜，质控线中羊抗鼠IgG抗体包被浓度为0.3～2mg/ml、用量为0.5～1.5μl包被液量/cm膜；

所述卡壳包括上壳和下壳，上壳上设置有加样孔和观察窗，所述加样孔对应检测试纸条的样品垫，所述观察窗对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线，所述上壳和下壳可拆卸式拼接而成，下壳上设置有固定检测试纸条的卡口，检测试纸条可以根据需要更换，卡壳可重复利用。

所述检测试纸条由如下方法制备：

(1)时间分辨荧光微球的活化