[实用新型]一种孕酮荧光微球免疫层析定量试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及生化检测技术领域，具体涉及一种孕酮荧光微球免疫层析定量试纸条。

背景技术

孕酮(Progesterone，P4)是一种性腺激素，由卵巢的黄体细胞及妊娠期的胎盘组织所分泌的，它是反映卵巢活动的精确指示剂，在雌性生殖的不同阶段，血浆孕酮富有特征性的变化。所以监测机体孕酮含量变化是预防和治疗母畜繁殖障碍性疾病的一种有效的方法。检测孕酮含量，必须要有高效、灵敏和特异性的检测方法。

1941年，Cons和Kaplan用荧光素和抗体结合来定位组织中的抗原，从而提出了荧光免疫分析法的概念。荧光素等有机荧光分子一直是分析领域中常用的标记物。自20世纪70年代以来，Ambrome、Mathies、Nguyen等分别成功地实现了荧光单分子检测。然而，在实际检测分析中，由于生物制品、溶剂及溶质等的散射光、本底荧光及化学发光物质的干扰，以及荧光染料之间的一些光谱重叠，使检测所受的干扰极多，致使传统荧光分析的敏感性大大降低，其灵敏度仅是理论值的0.1％---1％，很难适应对微量抗原抗体的检测识别。1983年，Soini和Kojola等首先报告以镧系元素标记为示踪鳌合物与时间分辨荧光测量相结合，建立了一种新的非放射性微量分析技术——时间分辨荧光免疫分析。

在免疫分析法被大量应用于激素分析的情况下，放射免疫法的诸多缺点如示踪物储藏时间短、废物核辐射泄露、必须特殊的放射性装置等也渐渐受到分析人员的诟病，在此基础上引入了酶联免疫法等非放射性免疫分析法。WalterHubl等于1988年用辣根过氧化物酶作为酶标记，开发了一个双抗体/聚乙烯乙二醇固相酶联免疫的方法，该方法使用涂有蛋白A和第二抗体的微量滴定管，大大节约成本，且方法有较好的重复性(相对标准偏差为5.0％～6.0％) 和回收率(91％～97％)。古巴免疫分析中心的Ernesto CarlosGonzale等人于2008 年开发了一种快速、简单的酶联免疫方法，以17α-羟孕酮结合碱性磷酸酶与17α- 羟孕酮结合血清竞争，采取兔抗体血清，分析滤纸上血点内17α-羟孕酮，分析缓冲液中以达纳错替代17α-羟孕酮甾体激素结合蛋白，整个分析时间为3h，分析范围是10～250nmol/L，日间和日内标准偏差与17α-羟孕酮浓度有关分别为 5.5％～8.2％和6.4％～9.1％，分析回收率达到98％～103％。

酶联免疫测定法(ELISA)是常规检验中较常用的一种方法，是20世纪70 年代在放射免疫基础上发展起来的一种免疫分析技术。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。而以荧光素标记抗原或抗体，利用被检物质在反应体系中特异结合位点荧光的强弱，由荧光显微镜、流式细胞分析仪和自动化电子成像计算机进行定性、定量分析的荧光免疫技术。利用具有潜在荧光的底物作为酶标抗体(抗原)，当此类底物被酶分解后，其产物可产生荧光，据此可以进行荧光酶联免疫分析(ELFIA)。这种方法综合利用酶联免疫技术中酶解产物所具有的累计放大性和荧光测量的高度敏感性，大大提高了分析的灵敏度。

国内的孕酮检测主要是吸收国外的先进技术和经验，进行自主创新发展起来的，并取得了良好的效果。1974年开始应用放射免疫诊断技术在全乳孕酮方面的研究，1981年对奶牛试验取得成功。西北农学院李永鹏等也进行了奶牛乳汁孕酮的放射免疫测定工作。南京农业大学杨利国等初步研制了全乳孕酮酶免疫测定试剂盒，并应用于临床检测，取得了良好的效果，但其保质期比较短.

国家检测中心发现常规的化学分析方法缺乏定量检测类固醇类激素的高灵敏度，需要进一步优化。用于化合物定量的免疫分析方法如ELISA，改进定量方法的制定是未来研究的新领域。浙江大学与四川农业大学都对相关的酶联免疫测定法进行改进，四川农业大学郭大智(2002)对其研制的现场快速诊断奶牛早孕与发情的酶免疫分析测试盒申请了国家专利，主要是通过定性的方法判断怀孕、未孕及可疑，还没有得到广泛应用。国内有关检测奶牛乳汁孕酮的生物传感器其检测已有报道，但人血清和血浆中孕酮含量的定量检测还未见相关报道。目前，吉林大学和黑龙江八一农垦大学通过制备孕酮单克隆抗体，分别建立了不同的ELISA检测方法，并都在进行试剂盒方面的研制开发。