[实用新型]一种用于制备自体NK细胞的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及免疫细胞体外培养技术领域，尤其涉及一种用于制备自体NK细胞的试剂盒。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)，是机体内天然免疫的第一道防线。它具有高效抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节功能，在防御机体疾病中发挥着重要作用。自然杀伤细胞具有不受组织兼容性抗原限制，即杀伤活性无MHC限制。细胞具有广谱杀毒性，且不需要抗原递呈细胞启动即可直接进攻癌细胞。自然杀伤细胞通过直接溶解、释放穿孔素和分泌细胞因子两个方面进行杀瘤。细胞可以分泌TNF-ɑ(肿瘤坏死因子)、IFN-γ(干扰素)和IL-1细胞因子(白细胞介素)。这些细胞因子在调节淋巴细胞发挥免疫功能起着重要的作用。科学研究表明，自然杀伤细胞具有调节免疫功能和神经系统相互作用能力。理论上这种细胞可以成为高效治疗癌症免疫疗法。然而，自然杀伤细胞在外周血中含量仅为5％～10％，随着年龄增长，免疫器官衰老，细胞活性和数量随之降低。免疫功能降低，直接或间接导致疾病和恶性肿瘤发生。

目前，国内体外培养NK细胞方法主要有以下几种方法：一种是采用滋养层细胞扩增NK细胞方法，即将单个核细胞与肿瘤细胞株HFWT混合培养诱导扩增NK细胞，此方法虽然可以大大增强NK细胞杀瘤性和增值率，但由于在培养过程中引入了肿瘤细胞，虽经过致死剂量的γ-射线照射，如果发生存活的滋养层细胞随细胞一起进入人体，就会存在安全隐患。另一种采用免疫磁珠对单个核细胞进行细胞分选后再扩增的方法，这种方法分离出的细胞虽然纯度较高，但大大增加了研究成本，而且因为缺乏成熟的分选后体外培养工艺，所以很难在体外扩增，无法满足临床回输所需的细胞数量。

因此，国内目前的NK细胞培养试剂盒或NK细胞培养方法在细胞数量、细胞纯度和杀瘤性上不能满足临床和科研需要。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种功能针对性较强的用于制备自体NK细胞的试剂盒。

为了实现上述目的，本实用新型提供了一种用于制备自体NK细胞的试剂盒，包括盒体、盒盖、基座、细胞激活剂包被液试剂管、NK细胞刺激液试剂管、NK细胞扩增基础培养基试剂管、NK细胞扩增培养基试剂管、以及自体血浆试剂管，其中：盒体为顶面开口的不封闭盒体；盒盖可扣合在盒体上，用于封闭盒体；基座固定设置在盒体内；细胞激活剂包被液试剂管、NK细胞刺激液试剂管、NK细胞扩增基础培养基试剂管、NK细胞扩增培养基试剂管、以及自体血浆试剂管可移除的插入在基座上。

进一步的，细胞激活剂包被液试剂管包括PBS试剂管以及4-1BB抗体细胞激活剂试剂管；NK细胞刺激液试剂管包括细胞扩增添加剂试剂管、L-谷氨酰胺试剂管、OK-432试剂管；NK细胞扩增基础培养基试剂管包括细胞扩增添加剂试剂管、L-谷氨酰胺试剂管、IL-12试剂管；NK细胞扩增培养基试剂管包括IL-2试剂管以及IL-15试剂管。

进一步的，细胞激活剂包被液试剂管盛放有细胞激活剂包被液，细胞激活剂包被液含有8～12ug/mL的4-1BB抗体细胞激活剂；NK细胞刺激液试剂管盛放有NK细胞刺激液，NK细胞刺激液含有体积分数为20～30％的细胞扩增添加剂、体积分数为15～25％的L-谷氨酰胺、以及终浓度为80～120U/mL的OK-432；NK细胞扩增基础培养基试剂管盛放有NK细胞扩增基础培养基，NK细胞扩增基础培养基含有体积分数为20～30％的细胞扩增添加剂、体积分数为15～25％的L-谷氨酰胺、以及终浓度为80～120U/mL的IL-12；NK细胞扩增培养基试剂管盛放有NK细胞扩增培养基，NK细胞扩增培养基含有终浓度为650～750U/mL的IL-2、以及终浓度为20～30ng/mL的IL-15。

进一步的，盒体的两侧还设置有防滑纹或盒体的两侧还设置有便于盒体移动的把柄。

进一步的，基座上还设置有插孔，插孔的孔壁粘接有环状防滑橡胶套，细胞激活剂包被液试剂管、NK细胞刺激液试剂管、NK细胞扩增基础培养基试剂管、NK细胞扩增培养基试剂管、以及自体血浆试剂管插入插孔内并与防滑橡胶套挤压接触。

本实用新型的一种用于制备自体NK细胞的试剂盒，具有以下有益效果：

1、本实用新型的用于制备自体NK细胞的试剂盒设置有细胞激活剂包被液试剂管、NK细胞刺激液试剂管、NK细胞扩增基础培养基试剂管、NK细胞扩增培养基试剂管、以及自体血浆试剂管，可以满足临床级别用的自体NK细胞制备的需要，功能针对性较强。