[实用新型]一种肺癌四基因ctDNA检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种基因检测试剂盒，尤其涉及一种肺癌四基因ctDNA检测试剂盒。

背景技术

DNA是所有生物遗传的物质基础，存在于地球上所有生物的所有细胞中，生命的各种现象和功能实质上是细胞内或细胞间各种生物大分子相互作用的结果，在正常人群的血液中检测到游离DNA片段，即血浆游离DNA(cfDNA)，肿瘤患者体内cfDNA高于健康个体，且晚期肿瘤患者cfDNA水平更高，cfDNA与肿瘤关系密切，并与肿瘤转移相关性高，cfDNA中存在与肿瘤基因改变相同的DNA片段，即为ctDNA。ctDNA分析能够识别可认为存在的病灶。

目前，肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因，要有效的治疗疾病，最主要的是将药物以DNA等生物大分子为靶点，肺癌患者中NSCLC约占80％，EGFR是目前NSCLC治疗最重要的分子靶点，其是原癌基因C-erbB-1的表达产物，EGFR基因突变检测方法有很多，较为常用的方法直接测序法，DHPLC法和Scorpions ARMS法，直接测序法检测能力有限，检测灵敏度约20％左右，步骤复杂，费时费力，DHPLC法的检测灵敏度角直接测序法有所提高，约为1％～3％，Scorpions ARMS法可同时检测29种位于EGFR基因18-21外显子的常见突变，其灵敏度高达1％，然而Scorpions ARMS法采用的试剂盒检测成本太高，每份标本需3000-5000元，不适合普通患者的常规检测和筛查。

发明内容

本实用新型的目的在于提供一种能够快速、敏感而且简便的检测EGFR基因突变的试剂盒。

本实用新型所采取的技术方案：

一种肺癌四基因ctDNA检测试剂盒，包括盒体和盒盖，盒盖半包式与盒体连接，盒体内的中间设置采集针放置区，其一侧依次设有样本保存的试管，含有ARMS引物的试管，含内参引物的试管，含野生型引物的试管，含有Iaqman探针的试管，含DNA测序试剂的试管，另一侧依次设置有荧光定量PCR反应的八联管，含测序引物的八联管和阴阳性比对卡。

所述的盒盖的边缘和盒体的外侧前端设置磁性扣接件。

本实用新型的有益效果：本实用新型采用ARMS法语Iaqman探针相结合方法检测EGFR基因29种突变易感位点，使用更方便快捷，且成本更低，结果判读更直观。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图。

其中：1-磁性扣接件；2-样本保存的试管；3-含DNA测序试剂的试管；4-含Iaqman探针的试管；5-含野生型引物的试管；6-盒盖；7-阴阳性比对卡；8-含测序引物的八联管；9-荧光定量PCR反应的八联管；10-采集针；11-含有ARMS引物的试管；12-含内参引物的试管；13-盒体。

具体实施方式

一种肺癌四基因ctDNA检测试剂盒，包括盒体13和盒盖6，盒盖6半包式与盒体13连接，盒体13内的中间设置采集针10放置区，其一侧依次设有样本保存的试管2，含ARMS引物的试管11，含内参引物的试管12，含野生型引物的试管5，含Iaqman探针的试管4，含DNA测序试剂的试管3，另一侧依次设置有荧光定量PCR反应的八联管9，含测序引物的八联管8和阴阳性比对卡7。

所述的盒盖6的边缘和盒体13的外侧前端设置磁性扣接件1。

测试步骤为：采集检测样品：以采集针10静脉采集血浆，放于样本保存试管2中，离心柱法提取DNA，洗脱后进行EGFR引物扩增，分别进行野生型引物扩增和ARMS引物扩增，

EGFR外显子18上游引物序列：CAAATGAGCTGGCAAGTGC，

EGFR外显子18下游引物序列：TTTCCCAAACACTCAGTGAAAC，

EGFR外显子19上游引物序列：GCAATATCAGCCTTAGGTGCG，

EGFR外显子19下游引物序列：TGGAGATGAGCAGGGTCTAG，

EGFR外显子20上游引物序列：GCTTTTCCTCCATGAGTACGT，

EGFR外显子20下游引物序列：CATATCCCCAGGCAAACTCT，

EGFR外显子21上游引物序列：CTAACGTTCGCCAGCCATAAG，

EGFR外显子21下游引物序列：GAGCTCACCCAGAATGTCTG；