[发明专利]一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法测定壳聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用壳聚糖在弱酸性条件下，与胭脂红结合生成缔合物，用分光光度计在514nm处测定其吸光度，通过吸光度与壳聚糖含量在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础。建立了测定壳聚糖的紫外分光光度法，本方法测定受壳聚糖的分子量的影响，其具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点，适合在实际应用中推广应用。

技术领域

本发明涉及一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。

背景技术

壳聚糖为甲壳素经过强碱水解或酶解等化学法脱乙酞基(脱去55％以上)后形成的产物，是以β-(1，4)糖苷键串联的氨基葡萄糖线性大分子，化学名称是聚(1，4)一2-氨基一2脱氧-β-D葡聚糖。壳聚糖是含有游离氨基阳离子生物多糖，壳聚糖及其衍生物是重要的生物活性物质，具有抗肿瘤，抗凝血，抗血栓，降血脂和增强免疫力等功能，可作为医药保健品，食品，化妆品等的添加剂及制备人造皮肤和手术缝合线等的重要原^]。随着壳聚糖在生物医学广泛的应用，其与人们生活及健康也越来越息息相关，因此，壳聚糖的准确定量显得十分重要，建立简便高效的方法测定壳聚糖含量有着重要的意义，这将进一步推进壳聚糖在各个领域的应用。

目前常用测定CTS含量的方法有高效液相色谱法，紫外分光光度法，核磁共振法，电化学法荧光分析法，红外光谱法测等。如郑铁生，王亚娜，宗爱萍利用溴甲酚绿法测定壳聚糖的含量在0-10g/L范围内，该法线性关系较好：A＝0.0731c+0.771(R²＝0.9996)；谭学才，麦智彬，邹小勇，黄在银，蔡沛祥以茜素红(AR)为电活性探针间接测定无电活性壳聚糖(CTS)的新方法，采用标准加入法测定了不同样品中壳聚糖的含量，其回收率在97％-102％之间。高贵珍，焦庆才，丁一磊，陈雷研究发现在pH5.0的NaAc-HAc缓冲液中茜素红与壳聚糖反应生成复合物，在530nm处产生新的吸收峰，反应体系在422nm和530nm处吸光值变化与壳聚糖含量成线性关系，据此建立一种具有高选择性和高灵敏度的简便快速测定壳聚糖含量的分光光度法，在0-120mg/mL范围内呈现良好的线性关系(r＝0.997)，平均回收率为99.18％同时，他们^[12]发现在pH5.0的NaAc-HAc缓冲液中壳聚糖对茜素红S的荧光强度具有明显的猝灭作用，且猝灭程度与加入的壳聚糖浓度成线性关系，据此建立了一种测定壳聚糖含量的荧光猝灭法，检出限为0.473mg/L，平均回收率为100.60％。利用紫外分光光度法直接测定壳聚糖含量简便、快速且设备简便，因此，紫外分光光度法可广泛用于基层单位测定壳聚糖，对紫外分光光度法测定壳聚糖的研究和条件优化有着很大的发展前景及重要意义。

发明内容

为了克服现有技术中对于成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，本发明利用壳聚糖在弱酸性条件下，与胭脂红结合生成缔合物，用分光光度计在514nm处测定其吸光度，通过吸光度与壳聚糖含量在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础。建立了测定壳聚糖的紫外分光光度法，本方法测定受壳聚糖的分子量的影响，其具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点，适合在实际应用中推广应用。

一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：

1)绘制ΔA和不同分子量的壳聚糖浓度的标准曲线：