[发明专利]提升水稻籽粒淀粉品质的方法

说明书

本申请公开了一种提升水稻籽粒淀粉品质的方法，其重组载体构建，包括：(1)T4连接酶连接形成重组载体；(2)重组载体转化；(3)挑选连接正确的质粒转化农杆菌。(1)将带谷蛋白GluB‑1启动子Glb的质粒Puc18‑Glb酶切，分离回收目的片段，与酶切后的pCAMBIA1300上用T4连接酶连接形成中间载体，再将SBE1基因的cDNA片段酶切，分离回收目标片段，与酶切过中间载体用T4连接酶连接形成重组载体。本发明方法易行，操作简单，包括通过转基因方法融合基因转化水稻，获得转基因植株。

技术领域

本发明涉及分子生物学植物基因工程技术领域，特别涉及一种提升水 稻籽粒淀粉品质的方法。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，全世界约有1/2的人口以其为 主食。我国水稻育种长期偏重于提高产量，而忽视品质的改良与提高(黄发 松等，1998)。随着社会的发展，工、农业对稻米品质的要求越来越高，品质 育种已成为水稻育种的一个十分重要的方面。

稻米胚乳的主要成分是淀粉，因此淀粉的含量和性质直接影响稻米的 品质。淀粉贮藏在由高度有序的葡萄糖多聚体构成的半晶体质体淀粉体中。

根据其结构不同，淀粉可分为直链淀粉(amylose)和支链淀粉 (amylopectin)。直链淀粉是以a-1，4糖苷键连接而成的线性多聚糖，而支链 淀粉是由a-1，4糖苷键和a-1，6糖苷分支键连接而成的具有分支的多聚糖， 约占淀粉组成的70％-80％(French，1984)。当稻米的直链淀粉含量高时，煮 成的米饭较硬且无光泽，反之则柔软细腻。

稻米品质还与支链淀粉的精细结构和含量有关，直链淀粉含量相同时， 支链淀粉结构不同，品质也有差异，如缺乏中等长度葡聚糖链分支的支链 淀粉的水稻，糊化温度较低(Umemoto et al.，2002)。

目前人们对Wx基因的遗传调控机理已有深入研究，在该基因位点上 至少存在3种复等位基因，即Wxa、Wxb、wx，分别存在于普通籼稻、 粳稻和糯稻中。其中Wxb与Wxa相比，由于在第一内含子5’端剪切位 点的碱基由G突变为T，使得剪切效率大大降低，从而成熟mRNA量降低， 造成GBSS累积较少，进而影响直链淀粉的含量。

而wx则是由于在第二外显子的翻译起始位点下游108bp处比正常 的籼、粳稻多了一个23bp的重复，从而在第2外显子的下游172bp处

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供了一种改良水稻籽粒淀粉品质 的方法。本发明方法易行，操作简单，包括通过转基因方法，将SBE1基 因的一段cDNA片段和水稻籽粒专一性谷蛋白GluB-1启动子的融合基因 转化水稻，获得转基因植株；结合聚合酶链式反应和分子杂交方法，生化 分析方法等，在转基因植株后代中选育支链淀粉含量显著提高，单株产量 不变或有提高的转基因株系，创造水稻改良品质新材料。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种提升水稻籽粒淀粉品质的方 法，包括以下步骤：

A.重组载体构建；

B.转化农杆菌的建立；

C.获得独立转化植株；

D.选择纯合单株；

E.选留的纯合单株进行表型选择。

所述A.重组载体构建，进一步包括：

(1)T4连接酶连接形成重组载体；

(2)重组载体转化；

(3)挑选连接正确的质粒转化农杆菌。

所述步骤进一步包括：