[发明专利]利用白化苗创制水稻不育系的方法

说明书

本发明公开了一种利用白化苗创制水稻不育系的方法，包括以下步骤：选择含有纯合白化苗突变体的粳稻品种武运粳7号，利用基因枪转化技术和农杆菌转化技术来创制水稻细胞质不育系。A.白化苗突变体水稻愈伤的诱导；B.突变体水稻愈伤的基因枪转化；C.突变体水稻愈伤的农杆菌转化；D.抗性植株的获得。本发明方法解决了水稻三系杂交中不育系较少，对水稻种质资源利用率较低的缺点，为水稻三系杂交培育出更多更优良的品种提供了可能。

技术领域

本发明涉及分子生物学植物品系培育技术领域，特别涉及一种利用水稻白化苗突变体创制不育系的方法。

背景技术

杂交水稻品种主要分为三系杂交稻和两系杂交稻。所谓三系法中的三系是指核质互作雄性不育系、保持系和恢复系。1970年，在袁隆平先生的指导下，李必湖先生在海南三亚南红农场的水沟边发现了1株花粉败育的野生稻(简称野败，核质互作不育)，为雄性不育系的选育打开了突破口，也为我国“三系法”杂交水稻研究和应用奠定了基础。

随后通过全国育种家们的团结合作，成功实现了三系配套，率先在世界上实现大面积利用自花授粉植物的杂种优势。尤其是杂交稻“汕优63”的育成，使我国杂交水稻种植面积迅速扩大，至1984年，全国杂交水稻种植面积已达到1.33亿亩。随着更多优良组合的出现，至1991年杂交水稻种植面积已达到2.64亿亩，占水稻总种植面积的55％。

然而，随着研究和应用的不断深入，三系杂交育种的技术缺陷也逐渐突显出来，主要表现在以下几个方面：

(1)对种质资源利用的范围窄，虽然已经发现一些不育系，但相较庞大的水稻种质资源谱来说，不育系还是非常少；我国水稻种资源中可转成不育系或保持系的只有不到1％，而可用作恢复系的只有5％左右，这就导致不育系和恢复系遗传多态性不高，不易开展聚合育种，杂交组合同质化程度过高；

(2)受恢保关系的制约，培育优质、高产、多抗的杂交组合周期长、难度大、很难将新的突变体转入亲本品系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，利用白化苗创制新的细胞质不育系，为水稻三系育种提供更多的种质资源。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种利用白化苗创制水稻不育系的方法，选择含有纯合白化苗突变体的粳稻品种武运粳7号为受体材料创制不育系。

选择含有纯合白化苗突变体的粳稻品种武运粳7号，利用基因枪转化技术和农杆菌转化技术来创制水稻细胞质不育系。

包括以下步骤：

A.白化苗突变体水稻愈伤的诱导；

B.突变体水稻愈伤的基因枪转化；

C.突变体水稻愈伤的农杆菌转化；

D.抗性植株的获得。

所述A进一步包括：

(1)以所述武运粳7号突变体成熟种子去壳并烘干处理；

(2)配置脱分化培养基，并将上述(1)中的种子在超净工作台中消毒灭菌处理后接入脱分化培养基内；

(3)上述(2)中种子消毒灭菌处理，备用；

(4)愈伤组织诱导培养；

(5)将材料在上述(3)的条件下培养14d后取出，选取大小均一，质地紧密的愈伤即为水稻转化所需愈伤。

所述步骤(3)上述(2)中种子消毒灭菌处理的具体流程：先用95％乙醇进行浸泡处理，将酒精倒出后清洗完成后再用40％次氯酸钠震荡浸泡30分钟，浸泡结束后倒掉次氯酸钠溶液并用灭菌锅的蒸馏水清洗数次，备用。

所述步骤(4)愈伤组织诱导培养：将上述(2)中的培养基密封，放入28℃恒温暗培养箱和光照培养箱中进行愈伤组织诱导培养。