[发明专利]一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法

说明书

本发明公开了一种阿法骨化醇片剂有关物质的高效液相色谱分析方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈‑水的混合液为流动相，紫外检测器的波长为265nm，特别是采用了涡旋‑萃取‑浓缩的方式获得供试品溶液和对照溶液，极大地保证了该片剂中极低剂量的药物及其有关物质可以被检测到。本方法可同时分析阿法骨化醇片剂中所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各已知杂质的含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰的峰纯度均大于1.0。本发明为阿法骨化醇片剂的质量控制提供了简易和可靠的分析方法。

技术领域

本发明属于一种药物制剂的有关物质检查方法，具体涉及一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法。

背景技术

阿法骨化醇，化学名是(5Z，7E)-9，10-开环胆甾-5，7，10(19)-三烯-1α，3β-二醇。结构式如下所示，

。

阿法骨化醇在肝脏被迅速转化成1,25-二羟基维生素D3，后者为维生素D3的代谢物，起到调节钙和磷酸盐代谢的作用。由于这一转化过程很迅速，故阿法骨化醇的临床效应与1,25-二羟基维生素D3基本一致。其主要作用是通过提高体内血循环中1,25-二羟基维生素D3水平，从而增加钙、磷酸盐的肠道吸收，促进骨矿化，降低血浆甲状旁腺激素水平，能亢进(伴有骨病者)、甲状旁腺功能减退、营养和吸收障碍引起的佝偻病和骨软化症同时减少骨钙消溶。适用于防治骨质疏松症，肾原性骨病等。最早由美国骨保健国际公司（Bone CareInternational）研制，并先后在以色列，德国，日本，意大利获批上市。现丹麦Leo制药公司的产品在世界各国均有销售，多用于因维生素D代谢障碍而一起的钙代谢紊乱，临床用于骨质疏松症，慢性肾功能补全，甲状旁腺功能减退症，抗维生素D佝偻病，骨软化症等。

目前，我国已批准多家国内药企生产阿法骨化醇的片剂，胶囊剂，软胶囊剂等。

众所周知，阿法骨化醇片具有极低的单元药物含量，辅料占比很大，给样品的准确检测带来干扰，增加困难。但是一般来说，低剂量药物具有较强的生理活性，其降解产物也可能因较强的生理活性容易引起不良反应，因此低剂量药物的有关物质检查不能忽略，理应是质量控制的关键指标之一。

目前，美国、欧洲、日本等国药典中未收载阿法骨化醇片剂的质量标准，有关阿法骨化醇片剂的有关物质或质量研究鲜有报道。

最新的中国药典2015年版中收载了阿法骨化醇片的质量标准，但其中主要控制的是含量均匀度和含量测定，对于有关物质的检查项并未涉及，这可能也是由于阿法骨化醇本身主药的含量就极低，主药在制剂和贮藏过程中产生多种杂质，就更加难以与主成分分离并检测。

目前，阿法骨化醇片的分析方法主要依赖于精密的仪器和复杂的研究。

综上，为保证药品的质量和安全，需要开发一种灵敏度极高的分析方法和极为精细的前处理方法，以便简便快速准确的检查低剂量剂型阿法骨化醇片的有关物质，并获得较好的回收率，使得更好地控制该药品的质量，增加用药安全。

发明内容

本发明的目的在于提供一种阿法骨化醇片的有关物质的高效液相色谱分析方法，以克服现有技术中阿法骨化醇片的有关物质检查方法缺失的缺陷，更好地满足对于阿法骨化醇片的质量控制要求。

针对现有文献对阿法骨化醇片的降解杂质鉴定研究的缺失，本发明人通过工艺试制、强制降解试验对阿法骨化醇相关杂质进行富集、分离提纯，具体操作可采用本领域技术人员熟知的富集杂质和分离提纯的方法，例如，可以放大反应投料量，浓缩收集母液，进行柱层析、重结晶等方式提纯杂质。

本发明人总共鉴定了3个主要杂质，并且对其进行了溯源归属，包括：

杂质PY1，结构如下所示，

；

杂质PY2，结构如下所示，