[发明专利]一种稳定、抗干扰能力强的直接胆红素（氧化酶法）检测试剂及检测方法

说明书

本发明涉及血清直接胆红素检测技术领域，特别涉及一种血清直接胆红素(氧化酶法)检测试剂，试剂R1中含有缓冲液，氟化钠，NAC(N‑乙酰半胱氨酸)，4‑甲苯磺酸钠，脂肪酶，抗坏血酸氧化酶，α‑环糊精，蔗糖，海藻糖，PEG‑6000，脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO‑9)，防腐剂；试剂R2中含有缓冲液，胆红素氧化酶，蔗糖，海藻糖，PEG‑6000，脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO‑9)，防腐剂。本试剂明显提高了测试直接胆红素时的特异性和准确性，可防止反应体系浑浊、促进反应进行，使试剂的稳定性、抗干扰能力进一步提高。

技术领域

本发明涉及血清直接胆红素检测技术领域，特别涉及一种血清直接胆红素检测试剂，还涉及使用此检测试剂的检测方法。

背景技术

胆红素是红细胞被破坏后释放出的血红素脱铁形成的，80%胆红素来源于脾和肝，其余胆红素来源于骨髓。胆红素有三种存在形式，间接胆红素或非结合胆红素、结合胆红素、δ胆红素。其中结合胆红素和δ胆红素可以和重氮试剂直接反应，被称为直接胆红素。

各种类型的肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸均可见直接胆红素含量增高，而且比转氨酶敏感，尤其适合于慢性肝炎愈后评价及早期肝硬化的诊断。严重贫血时血清中的直接胆红素含量降低。因此，血清胆红素含量的检测有着非常重要的临床意义。

目前，直接胆红素的检测方法有重氮试剂法、高效液相色谱法、胆红素氧化酶法等，其中重氮试剂法操作简单，但该法灵敏度和抗溶血能力较差；而高效液相色谱法，灵敏度和特异性较好，但需要特殊仪器，难以推广应用；而胆红素氧化酶法，灵敏度高，不受溶血影响，但抗干扰能力和稳定性较差。

鉴于此，本发明在胆红素氧化酶法的基础上，通过优化反应体系，采用MES（2-(N-吗啡啉)乙磺酸）缓冲液，添加稳定剂如蔗糖、海藻糖、聚乙二醇6000等可有效提高试剂的稳定性；并添加α-环糊精、脂肪酶和抗坏血酸氧化酶，可以有效避免脂浊和抗坏血酸的干扰，大大增强试剂的抗干扰能力。并且本法试剂中加入优选剂量的胆红素氧化酶抑制剂氟化钠、NAC（N-乙酰半胱氨酸）、4-甲苯磺酸钠，明显提高了测试直接胆红素时的特异性和准确性，此外，优选的新型非离子表面活性剂脂肪醇聚氧乙烯醚（AEO-9）的加入可防止反应体系浑浊、促进反应进行，使试剂的稳定性、抗干扰能力进一步提高。该试剂操作简便快速，适用于自动化分析，是一种更加稳定、抗干扰能力强的直接胆红素（DBIL）检测试剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测血清直接胆红素（DBIL）的试剂及使用该试剂检测血清直接胆红素的方法。该试剂盒采用氧化酶法，可以有效检测血清直接胆红素的含量，具有抗干扰能力强，稳定性好等优点。

基本原理：

在pH为4.5左右的缓冲液中，当有抑制剂氟化钠、NAC（N-乙酰半胱氨酸）、4-甲苯磺酸钠存在时，在胆红素氧化酶（BOD）可选择性的将样本中的直接胆红素氧化成胆绿素，通过在450nm波长下测定此反应所引起的吸光度变化可求得直接胆红素的含量；

胆红素氧化酶

直接胆红素胆红素 胆绿素

pH=4.5左右，抑制剂

本发明是通过以下步骤得到的：

一种血清直接胆红素检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：

试剂R1中含有

缓冲液_{························································}50mmol/L，