[发明专利]一种蒙古黄芪病程相关蛋白及其晶体、生长方法和用途

权利要求书

1.一种蒙古黄芪病程相关蛋白，其特征在于，为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白的编码基因。

3.一种制备权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备蒙古黄芪总蛋白粗提液；

(2)阴离子交换层析；

将蒙古黄芪总蛋白粗提液上样阴离子交换层析柱，使用第一洗脱液洗脱阴离子交换层析柱，以除去杂质蛋白，然后使用第二洗脱液洗脱阴离子交换层析柱，使蒙古黄芪病程相关蛋白从阴离子交换层析柱上被洗脱；

(3)凝胶过滤层析；

将含有蒙古黄芪病程相关蛋白的第二洗脱液，上样凝胶过滤层析柱，然后使用第三洗脱液洗脱凝胶过滤层析柱，使蒙古黄芪病程相关蛋白从凝胶过滤层析柱上被洗脱，得到纯化的蒙古黄芪病程相关蛋白。

4.一种如权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白的晶体，其特征在于，所述晶体为AmPR-10晶体，其衍射数据收集相关参数见下表：

5.根据权利要求4所述的晶体，其特征在于，所述蒙古黄芪病程相关蛋白的三维结构中含有3个α螺旋和7个反平行β折叠，7个反平行β折叠包围在位于C末端的α螺旋的外周，使所述晶体形成疏水性内核。

6.根据权利要求5所述的晶体，其特征在于，所述3个α螺旋结构包括：α螺旋1为Pro16至Val24的氨基酸区段，α螺旋2为Ser27至Thr34的氨基酸区段，α螺旋3为Glu130至Leu152的氨基酸区段；

所述7个反平行β折叠包括：反平行β折叠1为Val3至Ser12的氨基酸区段，反平行β折叠2为Leu38至Glu45的氨基酸区段，反平行β折叠3为Ile53至Glu60的氨基酸区段，反平行β折叠4为Glu63至Asp75的氨基酸区段，反平行β折叠5为Val80至Gly88的氨基酸区段，反平行β折叠6为Val95至Ala106的氨基酸区段，反平行β折叠7为Ser112至Thr122的氨基酸区段。

7.一种生长如权利要求4-6任一项所述的蒙古黄芪病程相关蛋白的晶体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将纯化后的蒙古黄芪病程相关蛋白配制为1mg/mL的蛋白溶液；

S2、将步骤S1中蛋白溶液与母液等体积混合后，利用悬滴式蒸汽扩散法形成蒙古黄芪病程相关蛋白的晶体；

所述母液中包含100mM的Tris和20％(w/v)的PEG-3350，pH为7.5。

8.根据权利要求7所述的生长方法，其特征在于，所述步骤S2中晶体的生长温度为18℃，生长时间为7天。

9.一种蒙古黄芪病程相关蛋白的共结晶晶体，其特征在于，所述共结晶晶体由权利要求4-6任一项所述的晶体，或以权利要求7-8任一项所述的生长方法得到的晶体，与玉米素共结晶形成；所述共结晶晶体具有P4₁的空间群，晶胞参数为：a＝87.119埃，b＝87.119埃，c＝37.218埃，α＝β＝γ＝90。

10.权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白在制备治疗肺纤维化的药物中的用途。

11.权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白在制备抑制木瓜蛋白酶活性、HYP表达水平、TGF-β1表达水平、MDA表达水平或上调SOD表达水平的产品中的用途。

12.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的蒙古黄芪病程相关蛋白、权利要求4-6任一项所述的蒙古黄芪病程相关蛋白的晶体，或以权利要求7-8任一项所述的生长方法得到的黄芪病程相关蛋白的晶体。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。