[发明专利]一种快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法

权利要求书

1.一种快速无损检测三角褐指藻胞内岩藻黄素的方法,其特征在于,包括如下步骤：

S1：建立标准曲线：取含量已知的三角褐指藻悬浮液已知样品，重悬从所述已知样品中收集的藻细胞，调整重悬液中藻细胞的细胞密度，用流式细胞仪检测藻细胞在533nm或585nm发射波长下的平均荧光强度值；将所述三角褐指藻悬浮液样品的岩藻黄素含量的对数值和相应测得的平均荧光强度值的对数值作线性回归,即得标准曲线；

S2：制备待测样品：重悬从待测三角褐指藻悬浮液样品中收集的藻细胞成待测品重悬液，调整所述待测品重悬液中藻细胞的细胞密度，即得待测样品；

S3:用流式细胞仪检测待所述待测样品中藻细胞在在533nm或585nm发射波长下的平均荧光强度值，根据步骤S1建立的标准曲线，计算所述待测样品中的岩藻黄素含量。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤S1和S2中藻细胞的细胞密度均需调整至6×10⁵～2×10⁶CFU/mL之间。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述步骤S1中，在533nm发射波长下的平均荧光强度值，获得的线性回归曲线为Y＝2.2378X–7.1675(R²＝0.8787)，Y表示三角褐指藻胞内岩藻黄素含量(mg/g干燥粉)的常用对数值，X表示流式细胞术测定在533nm发射波长下的平均荧光强度的常用对数值；在585nm发射波长下的平均荧光强度值，获得的线性回归曲线为Y＝2.438X–6.3187(R²＝0.9267)，Y表示三角褐指藻胞内岩藻黄素含量(mg/g干燥粉)的常用对数值，X表示流式细胞术测定在585nm发射波长下的平均荧光强度的常用对数值。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2中重悬采用磷酸盐缓冲液，其浓度为10mM，pH为6.8～7.6。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述流式细胞仪在检测样品的荧光强度值时的进样流速在14～100μL/min之间；优选流速为35μL/min。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中的已知样品及步骤S2中待测样品在用流式细胞仪检测前还需用孔径5～40μm的水相滤膜或有机相滤膜过滤；所述步骤S1和S3中的对数值是以10为底的对数。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述已知样品的岩藻黄素含量采用HPLC法或紫外可见分光光度计法测定。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中已知样品的岩藻黄素含量通过HPLC法测定,包括以下测定步骤：

a)、已知样品的峰面积测定：将三角褐指藻悬浮液样品冻干为藻粉,从所述藻粉中提取获得岩藻黄素提取物,用甲醇和甲基叔丁基醚按照体积比1：9～9:1混合后溶解所述岩藻黄素提取物，然后用高效液相仪测定其液相峰面积；

b)、建立HPLC法标准曲线：用甲醇和甲基叔丁基醚按照体积比1：9～9:1的混合溶剂将岩藻黄素标准品配制若干浓度梯度的岩藻黄素标准品溶液，测定所述若干个浓度梯度的岩藻黄素标准品溶液的液相峰面积，将标准溶液的液相峰面积与相应的标准品溶液浓度做线性回归，绘制HPLC法标准曲线；

c)、根据步骤b)中建立的HPLC法标准曲线,计算步骤a)测定的已知样品的峰面积所对应的已知样品的岩藻黄素含量。