[发明专利]一种定量sST2的Elisa检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种定量sST2的Elisa检测试剂盒及其制备方法与应用，旨在提供一种操作简单、检测时间缩短、准确度高、分析性能稳定；其技术方案包括所述检测试剂盒包含有sST2稀释液、洗涤液、检测抗体、显色液、终止液、多个不同浓度的sST2标准品、sST2质控品和微孔反应板，所述微孔反应板包被了sST2单克隆捕获抗体；所述的检测抗体为生物素山羊抗人sST2单克隆抗体。

技术领域

本发明涉及一种Elisa试剂盒，具体地说，是一种定量sST2的Elisa检测试剂盒，本发明还涉及该试剂盒的制备方法。

背景技术

移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease，GVHD)是由于移植后异体供者移植物中的T淋巴细胞识别受体的不同组织相容性抗原而增生分化，在受体内增生到一定程度后把受体的某些组织或器官作为靶目标进行免疫攻击而产生损害，是异基因造血干细胞移植的主要并发症和死亡原因之一，按发生时间分为急性GVHD(aGVHD)和慢性GVHD(cGVHD)。急性GVHD的发生率为30％-45％，发生在移植后早期，是移植后早期死亡的重要并发症之一。由于aGVHD早期表现缺乏特异性，如仅有轻微的皮肤瘙痒、皮疹、恶心、腹泻等，易与感染或不良反应相混淆，不易在发病早期明确诊断并给予即使治疗；目前对aGVHD的治疗以免疫抑制为主，首选甲泼尼龙，但近半数患者疗效欠佳，并可能减弱移植物康白血病效应、增加感染机会；且激素无效的GVHD患者移植相关死亡率增加，总生存率降低。故及早评估出aGVHD及aGVHD是否向cGVHD进展对移植的成功率非常重要。

造血干细胞移植患者术后发生aGVHD，其主要原因是供者骨髓内的成熟T淋巴细胞识别受者体内的细胞表面MHC-I和MUC-II及所递呈的多肽而导致供者的T细胞的激活、增殖并浸润到GVHD的靶器官，攻击靶器官而造成靶器官的损伤，Th1和Th2细胞在aGVHD过程中发挥重要作用。

ST2(suppression of tumorigenicity-2)是IL-1受体家族的成员之一，其特意性配体为IL-33。ST2/IL-33途径在Th2细胞介导的疾病中发挥着关键的作用；可溶性ST2(soluble ST2，sST2)可以作为IL-33的诱骗性受体，使Th2细胞向Th1细胞漂移，在aGVHD的病理生理学过程中发挥重要作用。

美国R&D Systems公司研制的Human ST2/IL-33R ELISA试剂盒利用双抗体夹心酶联免疫法在微孔板上定量检测天然和重组人ST2的浓度，可用于检测培养细胞、血清和血浆样本。该试剂盒为非即用型试剂盒，仅包含粉末状的Capture Antibody、Detection Antibody、Standard以及Streptavidin-HRP。该产品需要自己配备96孔微孔板、PBS缓冲液、洗涤液、试剂稀释液、终止液及显色液；包被Capture antibody的微孔板需要自己制备，产品检测时间非常长；且内置高浓度标准品，检测时需要事先溶解配制并逐级稀释至各标准品点，过程较繁琐并容易引入操作误差；且所有粉末状试剂需要自行溶解配制，浓度控制不易统一。同时试剂盒同样不配备质控品，实验时对检测系统进行质量控制时需要额外购买校准物质，增加检测成本和检测时间。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种定量sST2的Elisa检测试剂盒制备及其制备方法，该试剂盒操作简单、检测时间缩短、准确度高、分析性能稳定。

为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：

一种定量sST2的Elisa检测试剂盒，所述检测试剂盒包含有sST2稀释液、洗涤液、检测抗体、显色液、终止液、多个不同浓度的sST2标准品、sST2质控品和微孔反应板，所述微孔反应板包被了sST2单克隆捕获抗体；所述的检测抗体为生物素山羊抗人sST2 单克隆抗体。

进一步的，上述定量sST2的Elisa检测试剂盒，所述的多个不同浓度的sST2标准品为八个不同浓度的标准品。