[发明专利]一种针对破伤风毒素的全人源单克隆中和抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种针对破伤风毒素的全人源单克隆中和抗体。本发明通过高通量全人源单克隆抗体研发综合技术平台开发出了全人源抗破伤风毒素中和抗体。本发明的中和抗体具有高亲和力、强特异性，对于破伤风感染的预防和治疗具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种针对破伤风毒素的全人源单克隆中和抗体及其应用。

背景技术

破伤风毒素是破伤风杆菌产生的一种神经蛋白质毒素，通过抑制性神经递质的释放，引起超反射反应和横纹肌痉挛；可导致患者全身性肌肉强直性痉挛，发展至严重者或因全身性衰竭及窒息而死亡，称之为破伤风。破伤风毒素是已知最毒的毒素之一,经纯化的破伤风毒素对小鼠的致死剂量为0.1ng/kg,对豚鼠的致死剂量为0.3ng/kg，推测对人的致死剂量为0.25ng/kg。破伤风毒素毒性极强，作用迅速。当患者感染破伤风后，体内存在大量破伤风杆菌和破伤风毒素，唯一有效的预防和治疗对策是及时注射抗破伤风毒素抗体，中和毒素使其失活并通过抗体受体的介导将毒素从体内清除。

目前市场上的抗破伤风毒素的抗体仅有马源破伤风外毒素(Tetanus antitoxin,TAT)和破伤风人血免疫球蛋白(Human tetanusimmunoglobulin,HTIG)，但临床应用都各有弊端。近年来有一些关于发明和制备人-鼠嵌合或人源/全人源抗破伤风毒素单克隆专利和文献。这些抗体虽能与破伤风毒素结合，但中和毒素的效价不高，且抗体的产业化生产问题尚未解决，均处于实验室研究或临床研究，还没有一种治疗性中和性抗体获批进入临床试验阶段。

高闻达等在申请号为201510363366.X的国内发明专利中公开了一种全人源抗破伤风毒素单克隆抗体,该抗体是由人的外周血细胞为材料与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0细胞融合后获得的抗破伤风毒素单克隆抗体；该发明表明未经工艺优化的CHO细胞的产量达到1-1.2g/L，经流加等工艺优化可达到2-5g/L；而且其效价约为0.2IU/0.5ug，即超过400IU/mg。该工作虽然显示在动物实验部分描述了毒素中和活性和小鼠存活的数据，但是并没有其他功能性试验数据和相关后续研究报道。

因此，利用更先进的技术，寻找更加高效的、安全的抗破伤风毒素单克隆抗体在本领域中具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种安全的、高效的且特异性的针对破伤风毒素的全人源单克隆抗体，并揭示其示其可变区序列，更具体为其互补决定区(CDR)序列。

本发明的目的之二在于提供上述单克隆抗体的结合物、偶联物、试剂盒或药物组合物。

本发明的目的之三在于提供上述单克隆抗体的应用。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种针对破伤风毒素的全人源单克隆抗体，所述单克隆抗体具有重链可变区和/或轻链可变区：

所述重链可变区包括CDR1、CDR2、CDR3；

重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸；或与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列至少有80％同源性的、且功能相同或相似的氨基酸序列；

重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸；或与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列至少有80％同源性的、且功能相同或相似的氨基酸序列；

重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸；或与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列至少有80％同源性的、且功能相同或相似的氨基酸序列；

所述轻链可变区包括CDR1、CDR2、CDR3；