[发明专利]一种抗破伤风毒素的全人源中和抗体

说明书

本发明公开了一种破伤风毒素的全人源中和抗体。具体而言，本发明涉及一种抗破伤风类毒素单克隆抗体，具有SEQ ID NO.1～3所示的重链CDR1～3区，SEQ ID NO.5～7所示的轻链CDR1～3区。本发明还公开了针对破伤风毒素的抗体在预防和治疗破伤风感染相关疾病中的应用，以及它们在检测破伤风感染中的应用。本发明提供的针对破伤风毒素的抗体为全人源的单克隆抗体，无免疫原性，且特异性好、亲和力高、效价高，解决了现有技术中破伤风感染预防和治疗药物的短板问题。

技术领域

本发明本发明属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种抗破伤风毒素的全人源中和抗体。

背景技术

破伤风是由破伤风梭菌(Clostridium tetani)感染引起的一种急性病，主要临床症状为牙关紧闭，局部或全身肌肉呈阵发性或强直痉挛。破伤风梭菌感染于伤口，在缺氧的条件下繁殖并产生外毒素—破伤风神经毒素(tetanus neurotoxin)(简称破伤风毒素)，毒素大部分被血流带进血液系统，并扩散到身体的全部神经途径，影响中枢神经系统。

破伤风梭菌没有侵袭力，只在污染的局部组织中生长繁殖。当局部产生破伤风毒素后，引起全身横纹肌痉挛。毒素在局部产生后，通过运动终板吸收，沿神经纤维间隙至脊髓前角神经细胞，上达脑干，也可经淋巴吸收，通过血管到达中枢神经。毒素能与神经组织中的神经节工苷脂结合，封闭了脊髓抑制性突触末端，阻止释放抑制冲动的传递介质甘氨酸和γ氨基丁酸，从而破坏上下神经原之间的正常抑制性冲动的传递，导致超反射反应(兴奋性异常增高)和横纹肌痉挛。

虽然注射破伤风疫苗可以完全预防破伤风的临床症状，但由于没有接种疫苗或免疫效应过期从而导致破伤风杆菌感染的情况依然非常普遍。

破伤风毒素毒性强，作用迅速。当病人被确诊为感染破伤风杆菌后，体内一般已存在大量细菌和毒素，使用抗菌素已来不及拯救病人生命。因此预防和治疗方法破伤风的唯一有效的方法是及时注射抗破伤风毒素的抗体，与毒素进行中和反应而使毒素失活，并通过抗体受体的介导将毒素从体内清除。因此，制备无免疫原性、亲和力高、特异性强、效价高的破伤风毒素全人源中和抗体在本领域中具有非常重要的意义。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的主要目的在于提供一种无免疫原性、亲和力高、特异性强、效价高的针对破伤风毒素的全人源单克隆抗体及其抗原结合片段，以及编码它们的序列，产生它们的细胞株，和应用它们进行诊断、预防或治疗的方法和用途。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文中所使用的，术语“破伤风毒素”是指破伤风梭菌在厌氧条件下产生的分泌蛋白破伤风毒素，其是本领域公知的(参见NCBI GENEBANK数据库等公开序列)。

如本文中所使用的，术语“抗体”是指，是指通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。