[发明专利]鸡血球抗氧化肽及其发酵制备方法

说明书

本发明提供一种鸡血球抗氧化肽及其发酵制备方法。该方法包括以下步骤：(1)菌种活化；(2)血球培养基制备；(3)接种发酵；(4)发酵液的分离纯化。所述抗氧化肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供的抗氧化肽具有强自由基清除活性，对DPPH自由基、羟自由基等具有较强的清除作用，并具有较高的还原能力，在抗氧化活性开发和应用方面具有重要价值。

技术领域

本发明涉及动物源性抗氧化肽技术领域，具体地说，涉及一种鸡血球抗氧化肽及其发酵制备方法。

背景技术

在需氧代谢过程中，氧气发生系列还原反应以调节信号转导和内环境稳态，同时伴随着活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的形成。正常状态下，ROS产量与抗氧化防御系统处于动态平衡状态。一旦平衡被打破，过量的ROS等高活性分子则会导致蛋白质损伤、DNA突变、细胞膜磷脂氧化以及低密度脂蛋白改性，导致多种器官和系统的氧化性损伤，从而刺激产生危害机体健康的疾病，如肉鸡腹水综合征、动脉粥样硬化、糖尿病、白内障、神经退行性疾病、癌症等。

而补充外源性抗氧化剂如抗氧化肽等，有助于维持自由基与抗氧化防御系统的稳态平衡，防止、延缓或抑制脂质过氧化，减缓氧化损伤并帮助机体抵御疾病，具有重要的生理意义。抗氧化肽(antioxidative/antioxidant peptide)是指生物体内源性的或由生物体内蛋白质降解后生成的且具有抗氧化活性的肽类物质。因其分子量较小(通常由2～20个氨基酸组成)、结构简单而较易被吸收，因此抗氧化肽具有营养和功能的双重作用。与具有毒副作用而限量添加的化学合成抗氧化剂(叔丁基对苯二酚、丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯等)相比，该类活性物质具有稳定性高、活性强、高营养、易吸收、安全低毒等优点。因此，从自然资源中获取抗氧化活性肽已成为当前营养、医药等领域的研究焦点。

家禽血液蛋白质含量高(20％左右)，必需氨基酸(Lys、Leu等)含量丰富，是提取抗氧化肽的优质蛋白源。目前，国内外对家禽血液的研究甚少，从新鲜鸡血中制备高活性抗氧化肽的技术和产品更是未见报道。因此，充分开发我国丰富的家禽血液资源，深入并系统挖掘其抗氧化活性，为高效利用家禽血球提供渠道和技术依据，也为家禽血球蛋白发酵开发成抗氧化的功能性饲料和食品奠定理论基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种从鸡血中提取活性抗氧化肽的方法并制备得到氧化肽。

为了实现本发明目的，本发明提供的鸡血球抗氧化肽的发酵制备方法，包括以下步骤：(1)菌种活化；(2)血球培养基制备；(3)接种发酵；(4)发酵液的分离纯化。

步骤(3)接种发酵所用菌种为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)。

本发明的鸡血球抗氧化肽的发酵制备方法，具体包括以下步骤：

(1)菌种活化：将发酵所用的菌株接种到液体种子培养基中，进行摇瓶培养；

(2)血球培养基制备：采集鸡血，加入占血液总重量0.4％-0.8％的抗凝剂，采用连续离心法将鸡血分离为血浆和血球；将血球配制成血球培养基；

(3)接种发酵：向血球培养基中接入适量活化的菌种进行发酵培养；发酵结束后，离心，收集上清，过滤，收集滤液，检测抗氧化活性；

(4)发酵液的分离纯化：将滤液上样于离子交换色谱柱，用洗脱液进行洗脱，收集具有抗氧化活性的洗脱峰，并透析除盐；利用反相高效液相色谱进一步分离，乙腈洗脱，收集抗氧化活性最强的洗脱峰，冷冻干燥即得鸡血球抗氧化肽。

本发明中，鸡血可以为新鲜采集的鸡血，也可以是经过冷冻融化后的鸡血。冷冻的鸡血在使用前需进行低温解冻，尽量减少冷冻解冻过程对蛋白的破坏。