[发明专利]一种复合酶法提取肾茶多糖的方法

说明书

本发明属于中药活性成分提取生产工艺领域，具体涉及响应面分析优化复合酶法提取肾茶多糖的最佳提取工艺条件。本发明采用纤维素酶与木瓜蛋白酶酶配比为3:1的复合酶法提取肾茶多糖，对预处理后的原料用复合酶法热水浸提、灭活酶、脱色素、浓缩、除蛋白、醇沉、提取率测定等步骤，即按照纤维素酶与木瓜蛋白酶酶配比3:1、料液比1:70、复合酶用量约8％热水浸提。本发明采用四因素三水平的响应面试验获得了复合酶法提取肾茶多糖的最佳工艺条件：酶用量为8.44％、酶解pH值为4.11、酶解时间为3.05h、酶解温度为56.65℃，在此条件下肾茶多糖提取率为15.75％。

技术领域

本发明属于中药活性成分提取生产工艺领域，具体涉及响应面分析优化复合酶法提取肾茶多糖的最佳提取工艺条件。

背景技术

植物多糖是天然药物的重要组成部分，大量研究表明，植物多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖、免疫调节、护肝等功效，且细胞毒性极低。迄今，已有300多种多糖类化合物从天然产物中提取出来，其中从中药材中提得的水溶性多糖最为重要。目前，多糖提取的主要方法有水煎煮法、酸提取法、碱提取法、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取法等，这些提取方法都存一定的缺陷，如提取率不高，所含杂质较多，后续处理工序繁琐，或提取温度高，引起多糖分子结构变化、降解从而破坏多糖生物活性。此外，仪器设备成本高，不利于大规模工业化生产。植物成分往往被包裹在细胞壁内，要使细胞内的有效成分向提取液中扩散，必须破坏植物细胞壁，用一般的有机溶剂提取，细胞壁难以破坏，而酶法提取，提取条件温和，提取设备简单，提取效率高，可利用相应酶有效地破坏植物细胞壁，去除蛋白质，使细胞中的多糖更好地溶解出来，从而提高多糖得率。目前，多糖提取工艺多为均匀设计和正交设计，这些设计是采用固定其他因素，只改变一个因素的单因素考察法，不考虑因素之间的相互作用，难以考察多个响应值与因素之间的交互关系，只能对一个个孤立的因素进行分析，精确度不高。响应面分析法是一种最优化方法，它是将体系的响应作为一个或多个因素函数，考察各因素之间的相互作用，并借助软件可以三维模拟推测出更直观更精确的最佳工艺条件，并给出预测值。肾茶为唇形科(Lamiaceae)肾茶属(Clerodendranthus)植物肾茶[Clerodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu]的干燥全草。肾茶作为一传统中草药可用于治疗急、慢性肾炎，膀胱炎，尿路结石等症，具有抑制肿瘤、抗氧化、抗炎、抗菌、降血糖等作用。肾茶的多种功效与所含的肾茶多糖密不可分。为提高肾茶多糖的提取率，找出提取最佳工艺条件，本发明提供了响应面分析优化复合酶法提取肾茶多糖的工艺，复合酶法提取肾茶多糖，工艺简便，提取率高；提取工艺采用响应面分析设计，所得最佳工艺参数精确、可靠，为肾茶多糖的工业化生产和应用提供了确实可行的方法，对肾茶的综合开发利用及附加值的提高具有实际意义。

发明内容

本发明采用复合酶法提取肾茶多糖，并采用响应面设计确定最佳提取工艺条件，纤维素酶能更充分地破坏植物细胞壁，使肾茶多糖更易于扩散到提取液中，同时木瓜蛋白酶能更有效地分解与多糖结合在一起的蛋白质，从而将多糖释放出来，二者的结合最大限度地提高了多糖的得率，制备出含量相对稳定的肾茶多糖。

本发明所采用的方法为复合酶法从肾茶中提取肾茶多糖的工艺方法。

本发明所采用复合酶法提取肾茶多糖的方法为：在预处理后的肾茶粉末中加入复合酶进行浸提，灭活酶、脱色素、浓缩、醇沉、脱蛋白等步骤，具体要求为，在料液比1:70，pH为4的料液中加入4～10％复合酶，于55℃浸提取2h，浸提一次，灭活酶、活性碳脱色两次、醇沉两次，sevag法除蛋白两次，蒽酮-硫酸法测定多糖含量和提取率。工艺分为：原料预处理、添加复合酶浸提、灭活酶、脱色素、浓缩、醇沉、除蛋白、醇沉等步骤，具体按以下步骤操作：

(1)原料预处理：将干燥后的肾茶粉碎，过40目筛，加入30倍体积80％乙醇，45℃加热浸提，除去肾茶中的脂类、单糖、双糖、低聚糖等成分，减压过滤，晾干回收肾茶粉末；