[发明专利]一种土壤中泰乐菌素残留量的检测方法

说明书

一种土壤中泰乐菌素残留量的检测方法，它涉及一种土壤中泰乐菌素残留效价的检测方法，该方法包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备，之后采用高效液相色谱法以梯度洗脱的方式将上述标准品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪中，根据外标法计算泰乐菌素效价。本发明通过对色谱条件的优选及供试品、标准品制备方法的试验，建立了土壤中泰乐菌素的高效液相色谱检测分析方法；通过对色谱以及质谱系统的优化，建立了土壤中泰乐菌素的检测方法，通过方法学验证试验研究表明：所建立的方法准确度高、专属性强、重现性良好，能有效检测土壤中泰乐菌素效价。

技术领域

本发明涉及土壤的检测检验技术领域，特别是涉及一种土壤中泰乐菌素残留效价的检测方法。

背景技术

在我国，禽畜养殖业的规模越来越大，为了促进动物生长以及防病治病，抗生素使用量也随之增加，由此而产生的抗生素滥用问题愈发严重。抗生素在动物体内的残留量很少，大部分抗生素及降解产物会以粪便的形式排出体外，经过一定的处理或不作任何处理便施用于作物种植，尤其是大棚蔬菜种植，抗生素也随之进入土壤环境，并对土壤微生物及土壤酶活性产生影响，破坏生态环境，经食物链作用也可能进入人体，若产生耐药基因则会严重威胁人类健康。抗生素作为一种新的环境污染物所引起的危害不容忽视，必须高度重视。相关检测发现，土壤中抗生素的含量已达到11～300μg/kg，主要是磺胺类、喹诺酮类、四环素类抗生素。建立土壤中不同种类抗生素的痕量检测分析方法成为比较热门的探索方向。但土壤中的抗生素主要是对于四环素类抗生素的分析检测，泰乐菌素的检测报道比较少见，且土壤基质不同提取和净化条件的选择也有所不同。

泰乐菌素已经广泛的用于禽畜养殖业中，是目前国际上广泛使用的兽用抗生素之一，是使用最为广泛的猪饲料添加剂。据国家农业部统计，目前国际市场对泰乐菌素年需求量在1500吨左右，国内的年需求量为200吨。据估计美国每年有590吨的泰乐菌素用于牛和猪的饲料添加剂。日本有50％猪饲料添加了泰乐菌素。我国泰乐菌素已使用多年，而且大量出口到国外，泰乐菌素的年出口量均超千吨。在2007年出口的抗生素原料中，兽用抗生素的出口价值占了全部抗生素出口金额的28％，数量规模占了55％。大部分兽用抗生素2007年的出口量比上年同期有所增加，而硫酸黏杆菌素、泰乐菌素和吉他霉素的同比增长率较为显著。

由于泰乐菌素残留在土壤中会严重威胁到生态平衡，故为了研究泰乐菌素菌渣有机肥在土壤中环境行为、稳定性及衰减规律，必须首先建立土壤中泰乐菌素残留效价的检测方法。由于基质效应的影响，故不同于菌渣已建立的方法，需要重新建立在土壤中目标物质残留的检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决土壤中痕量抗生素残留的检测问题，而提供了一种土壤中泰乐菌素残留量的检测方法。

本发明的一种土壤中泰乐菌素残留量的检测方法，它是按照以下步骤进行的：

一、供试品样品制备：

1)称取含有泰乐菌素的土壤，加入提取剂，涡旋振荡1～5min后，于超声中辅助提取20～30min，以3000～4000rpm离心5～10min，取上清液，并收集沉淀备用；

2)将上步收集的沉淀，加入提取剂，涡旋振荡1min后，于超声中辅助提取30min，以3000～4000rpm离心10min，取上清液；

3)合并步骤1)和步骤2)的上清液，将上清液于40℃水浴旋转蒸发至原体积的1/4～1/5，得无机相，向无机相中加入甲醇溶液以及pH为5.5、浓度为0.15mol/L的乙酸钠缓冲溶液；充分震荡涡旋，待残渣全部溶解后，转移到离心管中，得待净化样品；

4)用甲醇和超纯水对HLB固相萃取柱进行活化，加入待净化样品，以1mL/min速度过柱，待样液全部流出后，用水和淋洗液依次进行淋洗，抽干所有的液体，分析物用甲醇洗脱并收集，摇匀，过0.45μm滤膜后，得供试品样品；