[发明专利]一种高密度发酵醋酸杆菌的方法

权利要求书

1.一种醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)菌体活化：将醋酸杆菌菌种接种至培养基上进行培养，实现菌体活化；

(2)摇瓶培养：将步骤(1)中经过活化的菌种接种至摇瓶中培养基上进行振荡培养，获得种子液；培养条件：摇瓶转速100～200rpm，温度28～30℃，振荡培养10～24h；

(3)种子罐扩培：按1％～20％的接种量将步骤(2)得到的种子液接入种子罐中培养基上进行培养；培养条件：搅拌转速100～300rpm，通气量0.1～1.0vvm，温度28～30℃，流加5～10M的氢氧化钠，控制发酵液的pH5.5～6.0，培养时间10～12h；

(4)发酵罐发酵：按1％～20％的接种量将步骤(3)得到的种子液接入发酵罐中培养基上进行培养，培养条件：搅拌转速100～300rpm，通气量0.1～1.0vvm，温度28～30℃，流加5～10M的氢氧化钠，控制发酵液的pH5.5～6.0，同时流加细胞浆液和1～10g/L苦瓜多肽，培养时间8～12h；所述细胞浆液为醋酸杆菌的细胞浆液，细胞浆液的光密度OD600为1～3。

2.根据权利要求1所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：步骤(1)中所述培养的条件为28～30℃下培养24～48h；步骤(1)中所述培养基为琼脂培养基，琼脂培养基的组成为：酵母膏1～2％，葡萄糖1～2％，琼脂1.5～2％，乙醇2～4％，pH5.5～6.0，百分数为质量百分数，余量为水。

3.根据权利要求1所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：步骤(2)中所述摇瓶的培养基配方：酵母膏1～2％，葡萄糖1～2％，KH2P04 0.15～1％，乙醇2～4％，pH5.5～6.0；步骤(2)中摇瓶体积250mL，装液量为20～100mL；

步骤(3)中所述种子罐的培养基组成：酵母膏1～5％，葡萄糖1～5％，KH2P040.15～1％，乙醇2～4％；步骤(3)中种子罐体积10L，装液量50～70％。

4.根据权利要求1所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：步骤(4)中所述细胞浆液为活菌数≥1×108cfu/mL的发酵液所提供的醋酸杆菌细胞浆液。

5.根据权利要求4所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：所述细胞浆液的制备具体是将活菌数≥1×108cfu/mL的发酵液进行浓缩，将获得的菌体进行破碎，加无菌水稀释成所需的光密度。

6.根据权利要求5所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：所述浓缩为离心浓缩，离心条件为，转速4000～5000rpm，时间为10～20分钟；所述破碎是指将具体进行高压均质，压力破碎条件为140～600bar。

7.根据权利要求1所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：步骤(4)中所述发酵罐的培养基组成：酵母膏1～5％，葡萄糖1～5％，KH2P04 0.15～1％，乙醇2～4％；发酵罐体积100L，装液量50～70％。

8.根据权利要求1所述醋酸杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：步骤(4)中所述细胞浆液和1～10g/L苦瓜多肽分别加入量≤发酵罐中发酵液体积的1％。