[发明专利]一种半滑舌鳎抗病免疫相关基因及其应用

说明书

本发明的目的是提供一种半滑舌鳎抗病免疫基因，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1，编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明首次克隆了半滑舌鳎类IgT基因，获得了其cDNA序列，设计了其表达检测的PCR引物，建立了皮肤粘液收集和粘液中总RNA提取及IgT基因表达的检测方法以及将皮肤粘液中IgT基因的表达水平作为抗病力评价指标的应用方法，从而创建了半滑舌鳎抗病力无损伤检测的分子方法，可以应用于半滑舌鳎抗病力测试及抗病良种选育。本发明的技术方法也可在其它鱼类上进行推广应用。

技术领域

本发明属于水产遗传育种技术领域，具体涉及一种半滑舌鳎抗病免疫相关基因及其在抗病力评价中的应用。

背景技术

半滑舌鳎主要分布在我国沿海地区，是我国重要的海水经济养殖鱼类，由于肉质鲜美，营养价值高而深受人们喜爱。近年来，我国半滑舌鳎养殖业迅猛发展，养殖规模不断扩大，养殖产量也逐年增加，已经成为我国主导水产养殖品种之一。但是伴随着半滑舌鳎养殖业的快速发展，越来越多的问题也开始暴露出来，其中最严重的就是高密度养殖带来了病害的频繁爆发，造成了严重的经济损失，尤其是哈维氏弧菌所引起的肠道和鳃的溃烂最为严重。药物虽然短时间内可以在一定程度上防治病害，但也会带来一些弊端，例如长期频繁使用抗生素及其它一些化学药物会引起病原微生物产生耐药性，药物在鱼类体内残留及对水环境造成污染等，对人类的生存环境和健康将会产生潜在的威胁。因此，探讨半滑舌鳎抗病免疫的分子机制，寻求抗病相关分子标记，进而开展抗病分子育种研究就显得非常迫切。

近年来在硬骨鱼类抗病免疫研究中发现了两个与哺乳类不同的新的免疫球蛋白(Ig)：IgZ和IgT，依据重链(H)恒定区结构的不同而分别命名。IgZ是在斑马鱼中首次发现的一种不同于IgM和IgD的新型免疫球蛋白。几乎同时，IgT在虹鳟中被发现，并证明IgT是一种免疫抗体，特别是在鱼类肠道粘膜抗感染免疫中起重要作用，并且推断IgT很有可能与哺乳动物的IgA相似，在肠道粘膜免疫中发挥主导作用。

抗病性状是鱼类的重要经济性状，但鱼类生活在水中，难以对其抗病力进行评价，迄今也少有鱼类抗病相关基因标记的报道。因此鱼类抗病力评价，特别是无损伤抗病力评价是困扰鱼类遗传育种科技工作者的一个难题。如果能够找到一个抗病相关基因标记并用于鱼类抗病力的无损伤评价，这将极大推动鱼类抗病良种的选育进程，加快抗病良种的培育。鱼类体表皮肤粘液是鱼类免疫防御的第一道防线，在鱼类抵抗外源病原微生物侵染中发挥着重要作用。尽管在鱼类皮肤黏液中检测到一些免疫球蛋白和酶类等活性物质的存在，但有关鱼类皮肤粘液与鱼体抗病力的关系的研究迄今尚未见报道。如果能从鱼类皮肤黏液中找到一种能够代表鱼类抗病力的基因标记，则有可能建立一种通过检测黏液中基因标记物的水平评价其抗病力的无损伤检测技术，这在鱼类抗病育种中将具有重大应用价值和广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种半滑舌鳎抗病免疫基因及其作为无损伤抗病力评价标记的应用方法，为鱼类抗病机理研究和抗病良种选育提供基因序列和抗病选育的基因标记。

本发明首先提供一种从半滑舌鳎中筛选的抗病免疫基因蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1；

编码上述抗病免疫基因的蛋白，其一种核苷酸序列为SEQ IDNO:2；

本发明另一个方面提供上述抗病免疫基因在半滑舌鳎抗病力检测中的应用方法；

本发明再一个方面提供一种检测上述抗病免疫基因的方法，是检测上述基因在半滑舌鳎皮肤粘液中表达的方法；