[发明专利]一种glnA基因缺失的耐铵固氮微生物及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201711476764.8 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108048384B | 公开（公告）日： | 2021-04-27 |
| 发明（设计）人： | 陈三凤;赵喜云;王天舒 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12R1/12;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;王璐 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 glna 基因 缺失 固氮 微生物 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种glnA基因缺失的耐铵固氮微生物，其特征在于，缺失如SEQ ID NO.1所示的glnA基因；所述微生物为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。
2.权利要求1所述的耐铵固氮微生物的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用SEQ ID NO.2～3所示的引物up(glnRA)-F和up(glnA)-R扩增glnA上游同源臂，利用SEQ ID NO.4～5所示的引物down(glnA)-F和down(glnA)-R扩增下游同源臂；
(2)将载体pRN5101用BamHI/SalI限制性内切酶处理，得到酶切片段；
(3)利用Gibson assembly master mix对步骤(1)所得的上游同源臂、下游同源臂和步骤(2)所得的酶切片段进行组装，组装后的重组质粒转化固氮多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa；
(4)利用载体质粒pRN5101携带的红霉素抗性筛选单交换菌株，通过多代培养后，再从中筛选不再具有红霉素抗性的菌株，经PCR验证和测序确认得到同源双交换后glnA基因缺失后的突变株。
3.一种提高多粘类芽孢杆菌在高铵条件下固氮酶活性的方法，其特征在于，通过使所述多粘类芽孢杆菌基因组DNA中的glnA基因缺失或不被表达，提高多粘类芽孢杆菌在高铵条件下固氮酶活性，所述glnA基因的序列如SEQ ID NO.1所示，所述高铵条件指多粘类芽孢杆菌所处环境中NH4+的浓度为100～400mM。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业大学，未经中国农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711476764.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
