[发明专利]一种样品包埋方法

说明书

本发明涉及一种样品包埋方法，属于生物技术领域。本发明的样品包埋方法包括以下步骤：(1)将明胶溶液植入已冷却的包埋盒中，填充包埋盒的槽体的一部分空间；每100mL所述明胶溶液中，含有8～15g明胶；(2)将待包埋的样品放入所述包埋盒中，然后向所述包埋盒中继续植入与步骤(1)完全相同的明胶溶液，直至包埋盒的槽体被充满；(3)密封包埋盒，然后使包埋盒中的明胶溶液固化，得到包埋了样品的固化包埋物。采用本发明的样品包埋方法进行样品包埋后，使得样品的冰冻切片变得易切、连续完整且无空洞，具有较大的实际应用价值。本发明的方法简单易行,可高效率地获得较高质量的冰冻切片,并应用于代谢组学的成像分析，技术成本低。

技术领域

本发明涉及一种样品包埋方法，属于生物技术领域。

背景技术

代谢物组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学后新兴的一门系统学科, 主要研究生物体受外界刺激或扰动后,各种代谢路径的底物或者产物的所有小分子量的代谢产物随时空变化的情况,并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式，是系统生物学的组成部分。能够作为生物标志物的重要代谢物的分离鉴定对于理解生物代谢途径具有重要意义。

生物标志物一般是指可供客观测定和评价生物体中在分子、细胞、个体或种群水平上因受疾病，病菌或环境污染物的影响而产生异常变化的信号，它是普通生理或病理的某种特征性的生化指标，通过对生物标志物的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。目前，生物标志物在医学、环境的检测等方面取得了重大进展，有价值的生物标志物已经成为目前研究的一个重要热点。目前,代谢组学研究的主要技术手段有液质联用(LC-MS)，核磁共振(NMR)、气质联用(GC-MS)等。这些技术能够实现对样品的非破坏性、样品前处理简单、高通量非选择性分析、较好的重现性等特点，被广泛应用于体液中的代谢组学研究，但此技术需要的研究样品量大、灵敏度低、分辨率不高，使用有一定的局限性。超高液相色谱飞行时间质谱联用(UHPLC-TOF-MS)技术，具有高灵敏度、高分辨率、质量范围宽等特点，而且飞行时间质谱(可以得到更精确的分子质量信息，进而有助于对代谢物的分子结构进行准确分析，UHPLC-TOF-MS 现己经在代谢组学研究中得到了广泛的应用.但是,这些技术不能提供生物组织样品的原位空间信息。

质谱成像(Mass Spectrometry Imaging,MSI)是一种基于质谱分析并将成像处理软件与质谱的离子扫描技术相结合的新型分子成像方法。它能够可视化分析样品区域指定质荷比离子，全面、快速获得被测物的相对含量及分布特征。相对于传统的成像方法，质谱成像具有免荧光标记、不需要复杂样品前处理、可提供丰富的被分析物空间分布信息等优点。因此，质谱成像技术越来越多地受到人们的关注,但研究材料包埋的好坏，是质谱成像能否成功的关键。2014年 Niehoff和2015年Bhandari等分别报道了用龙须胶(tragacanthgum),羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)及琼脂糖(Agarose)等作为包埋物，对果蝇 (双翅目)进行包埋后得到了较好的冷冻超薄切片，但这些包埋物用于同翅目的木虱、褐飞虱包埋，切片易碎，不完整。到目前为止，没有任何关于同翅目昆虫包埋后的质谱成像分析报道。而同翅目昆虫中的木虱是重要经济作物土豆的绿叶病、柑橘的黄龙病的重要传播者，褐飞虱是造成水稻减产的重要害虫，因此，对这些害虫的代谢物的分析，对于从根本上控制这些害虫具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术包埋样品易碎、不完整的缺陷而提供一种新的样品包埋方法，该包埋方法使样品易于切片且切片连续完整。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种样品包埋方法，其包括以下步骤：

(1)将明胶溶液植入已冷却的包埋盒中，填充包埋盒的槽体的一部分空间；每100mL所述明胶溶液中，含有8～15g明胶；

(2)将待包埋的样品放入所述包埋盒中，然后向所述包埋盒中继续植入与步骤(1)完全相同的明胶溶液，直至包埋盒的槽体被充满；