[发明专利]一株产海藻胶降解酶的海洋细菌及应用

权利要求书

1.产海藻胶降解酶的海洋细菌(Maribacter sp.)T28，已于2017年06月22日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC 1.15788。

2.如权利要求1所述产海藻胶降解酶的海洋细菌(Maribacter sp.)T28在制备海藻胶中应用。

3.如权利要求1所述海藻胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)初筛：将表层海水水样涂布于RO种子培养基培养，得到形态各异的单菌落，并纯化后保存；

2)复筛：将步骤1)初筛后得到的保种细菌纯化接入海藻酸钠液体培养基中，摇床培养，分离能降解海藻酸钠的海洋细菌。

4.如权利要求3所述海藻胶的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述表层海水由台湾龟山岛浅滩热液采集的表层海水水样。

5.如权利要求3所述海藻胶的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述RO种子培养基的组成为蛋白胨1.0g，酵母膏1.0g，乙酸钠1.0g，氯化钠20.0g，氯化钾0.3g，七水合硫酸镁0.5g，氯化铵0.3g，磷酸氢二钾0.3g，二水合氯化钙38.0mg，蒸馏水1000g，pH 8.0；所述培养可在30℃下培养14d；所述纯化后保存可采用体积百分比30％的甘油，甘油与菌液的体积比可为1︰1；保存的温度可为-80℃。

6.如权利要求3所述海藻胶的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述海藻酸钠液体培养基采用30ml海藻酸钠液体培养基，所述海藻酸钠液体培养基的组成为海藻酸钠2.0g，酵母膏1.0g，乙酸钠1.0g，氯化铵0.5g，氯化钠20.0g，氯化钾0.3g，七水合硫酸镁0.5g，二水合氯化钙0.05g，蒸馏水1000g,pH 7.6；所述摇床培养可在28℃下160rpm摇床培养。

7.海藻胶降解酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)从保种管中取出菌株涂布于2216E培养基平板上，纯化后接入RO种子培养基中，摇床培养至对数生长期，得种子液；

2)将步骤1)得到的种子液转接发酵培养基，摇床培养，得发酵液；

3)将步骤2)得到的发酵液经高速离心，得上清液，即为海藻胶降解酶。

8.如权利要求7所述海藻胶降解酶的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述纯化经过2～3次，所述2216E培养基的组成为：蛋白胨5.0g，酵母膏1.0g，柠檬酸铁0.1g，氯化钠19.45g，氯化镁5.98g，硫酸钠3.24g，氯化钙1.8g，氯化钾0.55g，碳酸钠0.16g，溴化钾0.08g，氯化锶34.0mg，硼酸22.0mg，硅酸钠4.0mg，氟化钠2.40mg，硝酸铵1.60mg，磷酸氢二钠8.0mg，蒸馏水1000g，pH7.6；所述RO种子培养基的配方可为：蛋白胨1.0g，酵母膏1.0g，乙酸钠1.0g，氯化钠20.0g，氯化钾0.3g，七水合硫酸镁0.5g，氯化铵0.3g，磷酸氢二钾0.3g，二水合氯化钙38.0mg，蒸馏水1000g，pH8.0；所述摇床培养条件可在28℃下160rpm摇床培养24h。

9.如权利要求7所述海藻胶降解酶的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述种子液的接种量为0.2％；所述发酵培养基的配方为：海藻酸钠2.0g，酵母膏0.5g，氯化铵0.5g，海盐23.0g，Tris-HCl 50mM，蒸馏水1000g，pH 7.8；所述摇床培养的条件可在28℃，160rpm摇床培养48h。

10.如权利要求7所述海藻胶降解酶的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述离心的条件为12000g×10min。