[发明专利]一种脑组织羰基化蛋白质提纯方法

权利要求书

1.一种脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，包括如下步骤：

(1)将含有羰基化蛋白质的样品和生物素酰肼混合，混合液中生物素酰肼的浓度为1-10mM，反应后，离心分离，得到生物素-蛋白质；

(2)将生物素-蛋白质和氰基硼氢化钠在0-5℃混合，混合液中氰基硼氢化钠的浓度为10-20Mm，过滤，然后用磷酸盐缓冲液超滤，得到蛋白质溶液；

(3)将蛋白质溶液和亲和素混合，0-5℃反应，离心，得到链接有亲和素的蛋白质溶液；

(4)将链接有亲和素的蛋白质溶液用D-生物素洗脱，离心，分离，除去D-生物素，洗涤，得到提纯后的羰基化蛋白质。

2.如权利要求1所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，含有羰基化蛋白质的样品的制备方法为，将动物细胞和蛋白酶抑制剂混合后，加入组织蛋白抽提试剂，混合，得到含有羰基化蛋白质的样品。

3.如权利要求1或2所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，生物素酰肼的浓度为5mM。

4.如权利要求1或2所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，步骤(1)的反应温度为0-30℃。

5.如权利要求1所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，步骤(2)中的过滤的筛网目数为0.3-0.5微米。

6.如权利要求1所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，步骤(3)中的离心步骤为，将蛋白质溶液和亲和素的混合液加入到离心柱中，600g离心，然后用磷酸盐缓冲液清洗，600g离心，重复1-2次。

7.如权利要求1或6所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，所述蛋白质溶液和亲和素混合溶液中，蛋白质和亲和素的重量体积比为1-2mg:1μL。

8.如权利要求1所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，步骤(4)的具体步骤为，在链接有亲和素的蛋白质溶液中加入磷酸盐缓冲液和D-生物素，D-生物素的浓度为1-10mM，4℃反应，离心，取下清液，用碳酸氢铵清洗，离心，重复至少1次。

9.如权利要求1或8所述的脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，步骤(4)中，洗涤的步骤为在除去D-生物素的链接有亲和素的蛋白质中加入碳酸氢铵，混合，抽取洗涤液碳酸氢铵，如此反复进行至少两次，最后将溶液和洗涤液碳酸氢铵混合，得到羰基化蛋白质。