[发明专利]靶核酸的检测方法在审
| 申请号： | 201711466811.0 | 申请日： | 2012-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN108103145A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 保坂宪光;东出诚司 | 申请（专利权）人： | 荣研化学株式会社 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816;C12Q1/6876 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 唐伟杰 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶核酸 检测 探针 荧光标记引物 退火 探针结合 荧光标记 试剂盒 猝灭剂 错开 荧光 解链 引物 猝灭 互补性 技能 | ||
1.检测样品中存在的1种以上的靶核酸的方法，是含有以下的步骤的检测核酸的方法：
(1)向样品添加
(A)荧光标记的引物或探针和猝灭剂标记的探针的组合，
所述荧光标记的引物或探针：
是用荧光剂标记的，
是与靶核酸具有互补性的寡核苷酸，且
解链温度(Tm)是50～70℃，和
所述猝灭剂标记的探针：
是被猝灭剂标记的，
是与所述荧光标记的引物或探针具有互补性的寡核苷酸，
且
解链温度(Tm)低于所述荧光标记的引物或探针的解链温度(Tm)、且在25℃以上；或
(B)多种的荧光标记的引物或探针和猝灭剂标记的探针的组合，
所述荧光标记的引物或探针：
是用发光波长不同的荧光剂标记的，
是与各自不同的多个靶核酸具有互补性的寡核苷酸，且
解链温度(Tm)是50～70℃，和
所述猝灭剂标记的探针：
是被对应于所述各个荧光剂的猝灭剂标记的，
各自是与所述多种荧光标记的引物或探针具有互补性的寡核苷酸，且
解链温度(Tm)各自低于所述多种荧光标记的引物或探针的解链温度(Tm)、且在25℃以上；
(2)在所述荧光标记的引物或探针的解链温度(Tm)以下、并且在高于所述猝灭剂标记的探针的解链温度(Tm)的温度保温该样品，在保温期间，在等温条件下，利用LAMP法和SMAP2法进行所述靶核酸的扩增；
(3)在所述猝灭剂标记的探针的解链温度(Tm)以下的温度，保温该样品；
(4)测量结合至靶核酸的荧光标记的引物或探针的荧光。
2.权利要求1中记载的检测方法，所述猝灭剂标记的探针的寡核苷酸碱基长度比所述荧光标记的引物或探针的寡核苷酸碱基长度短。
3.权利要求1中记载的检测方法，所述猝灭剂标记的探针的寡核苷酸包含修饰的碱基。
4.权利要求1～3的任一项中记载的检测方法，将所述荧光标记的引物或探针固定在固相面上使用。
5.用于在权利要求1中记载的检测方法中使用的试剂盒，是含有1种或多种的荧光标记的引物或探针、和猝灭剂标记的探针的组合的靶核酸检测用试剂盒，
所述荧光标记的引物或探针：
是用荧光剂标记的，
是与靶核酸具有互补性的寡核苷酸，且
解链温度(Tm)是50～70℃；和
所述猝灭剂标记的探针：
是被对应于所述各个荧光剂的猝灭剂标记的，
是与所述荧光标记的引物或探针具有互补性的寡核苷酸，且
解链温度(Tm)低于所述荧光标记的引物或探针的解链温度(Tm)、且在25℃以上。
6.权利要求5中记载的靶核酸检测用试剂盒，所述猝灭剂标记的探针的寡核苷酸碱基长度比所述荧光标记的引物或探针的寡核苷酸碱基长度短。
7.权利要求5中记载的靶核酸检测用试剂盒，所述猝灭剂标记的探针的寡核苷酸包含修饰的碱基。
8.权利要求5～7的任一项中记载的靶核酸检测用试剂盒，所述荧光标记的引物或探针被固定在固相面上。
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