[发明专利]胶质瘤预后标志物circ1:1804419|1806538及应用

说明书

本发明公开了一种胶质瘤预后标志物circ1:1804419|1806538及应用。即检测胶质瘤来源的circRNAcirc1:1804419|1806538的试剂用于制备胶质瘤患者的预后制剂。通过研究证实高表达circ1:1804419|1806538的患者，其生存预后较差。通过检测胶质瘤患者胶质瘤组织中circ1:1804419|1806538的表达水平，从而对胶质瘤患者做出预后判断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤预后的circRNA标志物、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤预后制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

胶质瘤是最常见的中枢神经系统的恶性肿瘤,具有较强的侵袭性和进展性。目前临床治疗上采用的主要方法有手术切除、放疗及化疗的综合疗法,但由于胶质瘤的生长特性,与周围脑组织界限不清,手术难以切除完全,而放疗、化疗由于胶质瘤对其耐受性等治疗的局限性,疗效有限,患者中位生存期较短,尤其对于高级别胶质瘤,治疗后复发率较高,预后差,中位生存期不足一年,病死率高,严重威胁患者生命影响人类健康。因此，寻找胶质瘤预后标志物对患者进行预后分析，以提高胶质瘤患者的术后生活质量，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

环状RNA(circRNA)是一类不同于线性RNA的内源非编码RNA,它是通过反向剪接形成的闭合环状RNA分子,不具有5’端帽子和3’端poly A尾巴结构,能够稳定存在于各种类型真核细胞中。随着生物信息学的快速发展和高通量测序技术的不断革新,目前已经在真核细胞中发现了大量内源性circRNA,其中一些circRNA表达丰度高并呈现出时空表达特异性和物种间保守性,表明circRNA可能在调节基因表达方面具有重要功能，有作为诸多疾病分子标志物的潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤患者预后的胶质瘤组织来源的circRNA标志物circ1:1804419|1806538，其序列如SEQ NO:1所示。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在胶质瘤组织中表达量的试剂在制备胶质瘤预后制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤预后试剂盒，能够测定胶质瘤组织中的circ1:1804419|1806538的含量。

所述的胶质瘤预后试剂盒，含有检测circ1:1804419|1806538含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤预后试剂盒，除circ1:1804419|1806538的引物外，还含有从胶质瘤组织中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。包括：

(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；

(2)以总RNA为模板将circ1:1804419|1806538逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及circ1:1804419|1806538所用随机引物；

(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括circRNA circ1:1804419|1806538实时荧光定量PCR特异性引物、GAPDH内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水。申请人通过荧光定量PCR对16例胶质瘤组织与6例正常脑组织进行分析发现，circ1:1804419|1806538在两者中的表达差异明显(见图1，P＝0.0424)，后对其中15例胶质瘤患者进行生存曲线分析，发现胶质瘤组织来源的circ1:1804419|1806538与患者的生存率相关(见图2，P＝0.04)，表达水平含量越高，生存预后较差。此法为胶质瘤的预后分析提供了强有力的技术支持，有助于提高胶质瘤患者的术后生活时间。

附图说明