[发明专利]一种对脑损伤类疾病有治疗作用的细胞亚群及其制备方法

权利要求书

1.一种对脑损伤类疾病有治疗作用的细胞亚群，其特征在于，所述细胞亚群来源于成体神经组织或诱导多能干细胞；

所述细胞亚群利用特异性标记物进行细胞亚群检测，所述特异性标记物包括巢蛋白、PAX6、SOX2、波形蛋白、Musashi-1和NGFR；所述细胞亚群检测的巢蛋白阳性表达率为90％～99％，PAX6阳性表达率为80％～90％，SOX2阳性表达率为90％～9％，波形蛋白的阳性率为95％～99％，Musashi-1的阳性表达率为85％～99％，NGFR的阳性率为40％～60％。

2.权利要求1所述的细胞亚群的制备方法，包括以下步骤：

1)将成体神经组织或诱导多能干细胞消化的单细胞悬液接种到无血清完全培养基中进行悬浮培养，得到原代细胞；

2)将步骤1)得到的所述原代细胞培养12～16天，得到原代神经细胞亚群，将所述原代神经细胞亚群进行重复的依次进行的消化和传代培养，传代至第五代，得P5代细胞；

3)将步骤2)得到的所述P5代细胞进行细胞亚群检测，检测阳性率合格的细胞作为种子细胞；

4)将步骤3)得到的所述种子细胞进行扩增传代培养，传代至P6代～P9代，得到细胞亚群。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述无血清完全培养基以DMEM/F12为基本培养基，包含终浓度为1～5％(v/v)的B-27、0.5～2.5％(v/v)的N2、0.01～0.05ug/ml的神经营养因子，0.01～0.05ug/ml的EGF，0.005～0.025ug/ml的LIF，1.0～3.0mmol/L的L-谷氨酰胺，0.5～1.5mmol/L的丙酮酸钠和0.5～1.5mmol/L的NAC。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述悬浮培养为在35℃下，体积分数为5％的二氧化碳条件下培养。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述消化使用的消化酶为木瓜蛋白酶、DNA酶I和L-半胱氨酸盐酸盐消化酶中的一种或几种。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述细胞亚群检测为将所述P5代细胞做细胞流式分析和异源微生物鉴定。

7.权利要求1所述细胞亚群在制备对脑损伤类疾病有治疗作用的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物为注射液或滴鼻制剂；所述注射液或滴鼻制剂中细胞亚群的浓度为(1×10⁶～1×10⁷)个细胞/200μL。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述注射液的制备方法包括：将所述细胞亚群溶于生理盐水；所述滴鼻制剂的制备方法包括：将所述细胞亚群负载于微载体上。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物的移植途径包括：鼻腔筛板吸附扩散、脑内局部定点注射、静脉回输和鞘内注射。