[发明专利]一种石见穿的快速繁殖方法

说明书

本发明提供一种石见穿的快速繁殖方法，经外植体的选取与灭菌、芽体的萌发、丛生芽诱导和增殖培养、生根培养、试管苗的移栽等步骤。本发明利用石见穿带芽根茎段为外植体，使得外植体取材较容易，一年四季均可取材，而且数量多，采用根茎芽体做外植体，保证了遗传稳定性，同时克服了组织培养中，愈伤组织在分化培养基上随着芽的分化而逐渐停止生长，失去增殖能力的弱点，可防止伤组织继代培养过程中，随着培养代数的增加，分化出来的苗出现变异的现象。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，涉及植物组织培养技术，具体地说是一种石见穿的组织培养方法。

背景技术

植物是药物的天然宝库，人们利用药用植物的历史源远流长，全世界约有75％的人口以植物作为治疗预防疾病的药物来源(邢建民，2001)。人类已经从植物中发现了许多具有高度生理活性的药物，目前从植物来源的药物占药物总量的25％以上(郑光植，1987)。我国的传统中草药已有数千年的历史，至今仍在我国和许多国家和地区广为使用。但由于传统的中草药获取方法是以采集和消耗大量的野生植物资源为代价的，当采集和消耗量超过自然资源的再生能力时，必然会导致物种的濒危甚至灭绝。同时随着自然生态环境的日益破坏，也进一步导致药用植物资源的匮乏。生物技术的蓬勃发展为从根本上改变传统药材的生产提供了一个崭新的方法，植物组织和细胞培养技术则是其中一个重要的手段。我国自1964年罗士韦教授首先报道了人参组织培养获得成功的研究成果以来，许多科学家先后从事了多种药用植物的组织培养研究。至今，我国药用植物的组织培养研究迅速发展。目前，世界各国对植物的药用开发和研究都十分重视，就以美国来说，其成药中有47％是以植物为原料制成的(谢启昆，1986)。为了解决药用植物的供需矛盾，人们采用人工栽培的方法扩大药源。但在人工栽培的药用植物中，有不少名贵药材等生产周期较长，如人参、黄连，如果以常规方法育种或育苗，需要花费很长的时间；另有一些药用植物如贝母、番红花等，因繁殖系数小、耗种量大，导致育种速度很慢，生产成本增加。利用植物的有性繁殖方式对其有效成分含量波动比较大，所以利用植物组织培养技术解决药用植物的植株再生与繁殖问题迫在眉睫。近年来，国内外在这方面已做了大量工作，已成功离体培养获得试管植株的药用植物至少有200种，如：云南黑节草、延龄草、高山红景天、莪术、水母雪莲、星花绣线菊、溪黄草、玉叶金花、辽东榴木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如红豆杉、艾、黄杨、大戟属植物、长春花、米仔兰、七叶一枝花、狗牙花和香榧等。

石见穿，又名五凤花、小丹参、月下红、乌沙草、墨面风，属于双子叶植物唇形科。一年生草本，高20到70cm。根多分枝，直根不明显，黄褐色。全株被倒生的短柔毛或长柔毛。茎单一或分枝，直立或基部倾斜，四棱形。叶对生；下部叶为三出复叶，顶端小叶较大，两侧小叶较小，卵形或披针形，上部叶主国单叶，卵形至披针形，长1.5-8cm，宽0.8-4.5mm，先端钝或急尖，基部近心形或楔形，边缘具圆锯或全缘，两面均被有短柔毛毛。轮伞花序，每轮有花6，组成总状花序或总状圆锥花序，顶生或腑生，花序长5-24cm；苞片披针形，长于小花梗；花萼钟状，长4.5-6mm。有11条脉纹，外面脉上和喉部均有长柔毛，花冠紫色或蓝紫色，冠筒长10mm，冠檐二唇形，上唇倒心形，先端凹，下唇呈3裂，中裂片倒心形；雄蕊花丝较短，藏于花冠之内。小坚果椭圆状卵形，褐色，光滑，包被于宿萼之内。花期8-10月。分布于江苏、安徽、江西、湖北、湖南、广东、广西、四川、云南等地。全草含异丹参酚酸C，丹参酚酸B、D，紫草酚酸，迷迭香酸，咖啡酸，原儿茶醛，R-(+)-β-(3，4-二羟基苯基)，齐墩果酸。活血化瘀；清热利湿；散结消肿。主月经不调；痛经；经闭；崩漏，便血；湿热黄疸；热热毒血痢；淋痛；带下；风湿骨痛；瘰疬；疮肿；乳痈；带状疱疹；麻风；跌打伤肿。全草主要与七叶一枝花等配合使用用于抗癌，造成对野生石见穿需求巨大，石见穿的价格也一路高升。

因此，为了满足日益增大的药用需求，种子收获量小，种子繁殖出苗率极低，种子培育过程烦琐，采挖石见穿时正值其开花季节至使种子急剧减少，同时保护石见穿的野生资源，利用组培快繁技术，实现人工栽培是最好的解决方法。