[发明专利]一种抗WSSV感染的胸腺素蛋白Cq‑TRP1在毕赤酵母中的表达与应用

权利要求书

1.红螯螯虾胸腺素命名为Cq-TRP1。

2.可用于获得一种抗WSSV感染的红螯螯虾胸腺素蛋白Cq-TRP1的真核重组表达载体的构建方法，其特征在于其步骤如下：

根据pPICZaA载体多克隆位点，设计扩增编码红螯螯虾Cq-TRP1(cDNA)基因ORF的特异性上游引物F1和下游引物R1，在上游引物F1的5′端添加EcoR I酶切位点；在下游引物R1的5′端添加XbaI酶切位点、终止密码子和编码His-tag的碱基；

上游引物F：

5′-CCGGAATTCAGCACCGAATCCTCACTCA-3′

下游引物R：

5′-GCTCTAGATTAATGATGATGATGATGGTGGGCTTTCTTCTCCTGCTCAATCT-3′；

PCR反应条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s60℃退火30s，72℃延伸30s，重复30个循环；72℃延伸10min；

利用琼脂糖凝胶纯化试剂盒回收PCR产物，回收的PCR产物经EcoRI和XbaI酶切后纯化回收，与EcoRI和XbaI双酶切线性化pPICZaA载体连接，构建好毕赤酵母表达重组载体pPICZaA-Cq-TRP1，测序鉴定读码框准确无误。

3.抗WSSV感染的红螯螯虾胸腺素蛋白Cq-TRP1的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)构建Cq-TRP1重组表达载体：将Cq-TRP1基因连接到真核表达载体pPICZaA，构建pPICZaA-Cq-TRP1真核表达载体；

2)将步骤1)所得真核重组表达载体导入毕赤酵母中，并对其进行诱导表达，获得表达产物；

3)先将步骤2)所得的表达产物进行透析，再进行亲和层析。

4.如权利要求3所述抗WSSV感染的红螯螯虾胸腺素蛋白Cq-TRP1制备方法，其特征在于所述红螯螯虾胸腺素蛋白Cq-TRP1的应用包括：

重组红螯螯虾胸腺素蛋白具有抑制WSSV复制的功能、在防控WSSV病害中具有潜在的利益价值、rCq-TRP1对WSSV感染复制具有抑制作用、在制备抗WSSV类新药和作为动物抗病饲料添加剂中具有潜在应用价值。