[发明专利]一种禽白血病病毒的化学发光抗原定量检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及一种禽白血病病毒的化学发光抗原定量检测试剂盒及检测方法，属于免疫检测领域，该试剂盒包括化学发光板、标记抗体、过氧化物溶液、校准品、样品稀释液和洗涤液，其中，化学发光板包被有抗p27蛋白的单克隆抗体Ⅰ，标记抗体为异米鲁诺标记的抗p27蛋白的单克隆抗体Ⅱ；单克隆抗体Ⅰ和单克隆抗体Ⅱ为配对抗体；校准品是由高纯度P27蛋白配制的；过氧化物溶液为含有乙酰氨基酚的过氧化氢溶液；样品稀释液为含有马血清、曲拉通和S9的磷酸盐缓冲液。本发明利用高纯度P27蛋白和一对配对单克隆抗体制备的禽白血病毒化学发光抗原定量检测试剂盒，其敏感性高，特异性性好，稳定性强，具有良好的可靠性，为更好地净化鸡群禽白血病奠定了基础。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体地，涉及一种禽白血病病毒的化学发光抗原定量检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

禽白血病是指由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽C型反转录病毒群引起的以禽类造血组织中某些细胞成分过度增生为主的各种可传染的肿瘤性疾病。以禽淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病和成髓细胞性白血病较为常见，通过垂直传播和水平传播两种方式在世界各国鸡群中广泛流行，引起鸡死亡、消瘦、贫血、生长发育不良，同时引起机体抵抗力下降和免疫抑制，是危害养禽业的主要疾病之一。依据病毒囊膜糖蛋白的抗原差异、病毒干扰实验、宿主范围和基因组的分子生物学特性，感染鸡群的禽白血病病毒（ALV）群主要分为A、B、C、D、E、J六个亚群。我国禽白血病的发生已相当普遍，临床病例从最初的商品肉鸡群发展到商品蛋鸡、地方种鸡群及其他家禽，并伴随着致瘤性增强及肿瘤多样性的发生。研究显示，我国的禽白血病毒呈现高感染率、高发病率，早期感染普遍、发病日龄明显提前，混合感染多发/频发，宿主范围扩展、肿瘤谱扩大，病理变化复杂化等特点，给我国的养禽业造成了巨大的损失。

目前，该病尚无彻底可行的防治措施，也无有效疫苗可用。预防本病的主要方法是培育具有遗传抵抗力的新品种，淘汰阳性鸡，净化种群，经过几代选育出无白血病的鸡群。

禽白血病病毒gag基因核苷酸高度保守，A、B、C、D亚群和新近发现的J亚群同源性在96%以上，gag基因编码群特异性抗原（gsa）。P27蛋白是gag基因编码的群特异性抗原（gsa）中一种高度保守的蛋白，也是ALV核心衣壳蛋白的主要成分，其含量占病毒总蛋白成分的30%以上，有许多病毒抗原点，是制备检测抗体的首选抗原。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。在化学发光免疫分析中包含免疫反应系统和化学发光系统两个部分。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术。化学发光系统的原理在于免疫反应中的发光底物和过氧化氢发生氧化还原反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。其具有灵敏度高，操作简便、快速的特点，但是在实际操作中，由于表达蛋白与单克隆抗体的选择不同或反应体系的多变性，对禽白血病病毒检测敏感性、特异性或稳定性的影响较大，未形成统一的标准化操作，产地的批量、定量检测难以实现。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种禽白血病病毒的化学发光抗原定量检测试剂盒及其检测方法。利用高纯度P27蛋白和一对配对单克隆抗体制备的禽白血病毒化学发光抗原定量检测试剂盒，可对禽白血病毒抗原进行检测，其敏感性高，特异性性好，稳定性强，具有良好的可靠性，可直接于产地进行批量、定量检测，为更好地净化鸡群禽白血病奠定了基础。

一种禽白血病病毒的化学发光抗原定量检测试剂盒，包括化学发光板、标记抗体、过氧化物溶液、校准品、样品稀释液和洗涤液，所述化学发光板包被有抗禽白血病病毒p27蛋白的单克隆抗体Ⅰ，包被浓度为0.5～0.8ug/ml；