[发明专利]胶质瘤诊断标志物circ17:47618350|47619164及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了胶质瘤诊断标志物circ17:47618350|47619164及应用。在本发明中，首次发现胶质瘤患者血清外泌体中circ17:47618350|47619164的表达水平相比于对照组明显升高(p＝0.0218)，ROC曲线分析则显示其对胶质瘤具有较高诊断价值(AUC＝0.875，P0.001，灵敏度和特异性分别为96.3％和72.7％)。因此通过检测胶质瘤患者血清外泌体中circ17:47618350|47619164的表达水平，可对胶质瘤患者做出早期、快速的无创性诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤诊断的血清circRNA标志物circ17:47618350|47619164、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤诊断制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

脑胶质瘤起源于脑部神经胶质细胞，是常见的颅内肿瘤，约占中枢神经系统肿瘤的40％～50％，其中恶性胶质瘤(世界卫生组织分类Ⅲ、Ⅳ级)约占所有胶质瘤的77.5％。脑胶质瘤具有“三高一低”的特点，即高发病率、术后高复发性、高病死率及治愈率低，最大的生物学特性是肿瘤细胞呈浸润性生长，手术常无法全部切除。尽管其治疗方法已经由单一的手术治疗发展到今天的手术加放化疗等综合治疗，但是在过去的几十年里脑胶质瘤患者的预后并未得到明显改善。因此，寻找脑胶质瘤早期诊断、疗效评价及判断预后的指标至关重要。

环状RNA(circular RNA，circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)，在最近几年逐渐受到广泛关注，是目前RNA研究的热点。circRNA通过外显子环化或内含子环化将3’和5’末端连接起来形成完整的环形结构，因而比线性RNA更稳定，更具有保守性，可在生物体中以多种类型大量存在。越来越多的研究者发现，circRNA在基因表达调控中具有重要作用，这丰富了人们对内源性非编码RNA的认识，提示circRNA在临床诊断和治疗方面具有广阔的前景。近年来逐渐发现外泌体中也含有大量的circRNA，可能发挥重要作用。目前，由于circRNA具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特点，在肿瘤诊断标志物方面正发挥越来越大的作用。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物。

主要内容包括：一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物circ17:47618350|47619164，其序列如SEQ NO:1所示。该circRNA位于人类的第17号染色体上，全长264bp。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在血清外泌体中表达量的试剂在制备胶质瘤诊断制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤诊断试剂盒，其能够测定血清外泌体中的circ17:47618350|47619164的含量。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，含有检测circ17:47618350|47619164含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，除circ17:47618350|47619164的引物外，还含有从血清中提取外泌体、由外泌体中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。

包括：

(1)提取血清外泌体所需试剂：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司购得，货号4478360；

(2)提取外泌体RNA所需试剂：Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇、无酶水；

(3)逆转录所需试剂：随机引物(Random Primer)、无酶水、5×逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶；