[发明专利]一种荧光检测试剂及制备方法及用于皮肤胆固醇的测量系统及方法

说明书

本发明涉及一种荧光检测试剂及制备方法及用于皮肤胆固醇的测量系统及方法，属于医学和光学等领域，将可以和胆固醇结合的毛地黄皂苷上通过化学手段连接上不同的荧光基团，通过配套的检测设备和检测材料，由检测到的荧光信号强弱即可反映皮肤胆固醇的含量，从而实现对与皮肤胆固醇相关疾病如患心血管疾病的风险进行评估，进而达到早期预警和防治的效果，指导人们合理规划自己的饮食与运动习惯，使身体始终处于健康的状态。本发明采用了高灵敏度的荧光检测试剂克服了皮肤胆固醇含量低而难以检测的缺点，实现了皮肤胆固醇的无创、快速、灵敏检测。

技术领域

本发明属于医学及光学等领域，尤其涉及检测试剂在慢病预测与防治应用领域，特别涉及一种荧光检测试剂及制备方法及用于皮肤胆固醇的测量系统及方法。

背景技术

随着人口老年化的加重与饮食习惯的改变，动脉粥样硬化类疾病的患病比例逐步上升，此类疾病属于慢性疾病范畴，一旦发病后非常难以逆转，而且，由手术治疗带来的痛苦严重影响患者的生活质量，鉴于此，急需要发展一种可以早期预警该类疾病的标志物和检测方法。

研究表明，高胆固醇血症与动脉粥样硬化具有很大的相关性。血浆总胆固醇、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)含量的测定是预测动脉粥样硬化类疾病广泛的使用方法之一，但是这些测量需要采集长时间空腹人群的血液，以排除食物中胆固醇的影响，而且，抽血为有创，增加了感染风险，检测设备一般比较昂贵，检测时间相对较长，所有这些因素均限制了其广泛应用，从而达不到大面积筛查的作用。

近年来，随着对胆固醇认识的加深，发现皮肤表皮中的胆固醇和动脉粥样硬化的发病密切相关，而且，通过对表皮胆固醇的测量，可对亚临床的动脉粥样硬化进行预测，从而可以实现早期动脉粥样硬化的预警，实现从饮食和生活方式上进行干涉，遏制疾病的继续发展。

皮肤活检可以对皮肤表面胆固醇进行测量，但是鉴于其获取样本比较痛苦、容易感染、所取样本涵盖表皮、真皮甚至皮下脂肪导致测量的并不是单纯的表皮胆固醇等原因，从而限制了其发展。

近年来，一种基于A-C-B试剂的皮肤胆固醇测量方法被广泛应用，该方法中A是可以与胆固醇具有亲和力的试剂，B为酶催化可视化试剂，C为将检测试剂与可视化试剂连接的结合试剂。预先将A-C-B加到测量皮肤表面，一段时间后，A-C-B与皮肤表面的胆固醇结合，再将显色试剂加入到检测皮肤表面，显色试剂在酶的催化下可以生成有色产物，产物的颜色和皮肤表面胆固醇的含量呈正比例关系，再通过光学方法如吸收法、散射法等检测。该方法中涉及到两种试剂，即结合试剂和显色试剂，整个测量过程大概4-5min，检测时间较长；另外，显色试剂加到检测部位后，颜色会随着时间的延长而逐步加深，所以需要严格控制显色试剂的检测时间，超过几秒钟就会导致测量结果差别很大，因此需要对检测的时间把握非常严格；再者，上述A-C-B试剂中涉及到生物大分子(酶)、聚合物和小分子，合成过程比较复杂，对于每一步合成产物的质量难以控制，加以酶活性容易受到温度、PH等环境因素的影响，保存时间相对比较短。

发明内容

本发明技术解决问题：克服现有技术的不足，提供一种荧光检测试剂及制备方法及用于皮肤胆固醇的测量系统及方法，通过一种荧光检测试剂结合荧光光谱信息即可对皮肤胆固醇进行测量，该种荧光检测试剂的引入代替了原来的两种试剂，使得检测时间从原来的4-5min变成了2-3min，进一步缩短了检测时间，提高被检测人的依从性；由于此种检测方法是直接测量检测部位的荧光，克服了原显色试剂需要严格控制显色时间的问题；另外，本检测试剂为小分子化合物，相对于原包含有含生物大分子(酶)、聚合物和小分子的检测试剂，合成过程中每一步中间产物的质量控制简单，在保存过程和检测过程中亦不易受环境因素的影响。

本发明技术解决方案：一种荧光检测试剂，用于皮肤胆固醇荧光测量，所述荧光检测试剂包括洋地黄皂苷和荧光基团，二者之间通过一个10-20个原子的亲水链连接，亲水链一方面提高检测试剂的水溶性；另一方面长亲水链的存在也会使荧光基团的引入而不对洋地黄皂苷本身性质造成影响。