[发明专利]小麦赤霉病谷粒菌种制作及使用方法

权利要求书

1.一种小麦赤霉病谷粒菌种制作方法，包括以下操作步骤：

a、准备新鲜饱满，无虫蛀及发霉的绿豆50g，加入纯净水1200ml，置于火上烧开，水沸腾后熬制15-20min，在绿豆刚刚开花的时候关火，用细纱布滤去绿豆残渣，仅保留绿豆水，补充纯净水至1000ml，配制成5%的绿豆水，备用；

b、准备干燥、无霉变、去净浮皮、碎渣的新鲜带壳谷粒1kg，置于干净容器中，加入温热的5%绿豆水，充分搅拌使谷粒完全湿润，加盖保湿4小时，使谷粒充分吸水；

c、滤去多余水分，将浸泡好的谷粒在阴凉通风处摊开晾干30min，使谷粒持水率达到60%，用手捏不成团即可；

d、将处理好的谷粒分装到聚丙烯灭菌袋中，每袋分装300-500g，轻压使其保持较为紧密的状态；

e、用透气的菌种袋海绵封口套环在聚丙烯灭菌袋两端进行封口，制作成菌筒，防止杂菌污染；

f、制作好的菌筒置于高压灭菌锅中，125℃灭菌2小时，放气后晾至室温；

g、在超净工作台上打开菌筒一端的海绵封口套环的海绵盖，用灭过菌的镊子夹取黄豆大的一小块赤霉菌种，放入菌筒一端谷粒上，盖好透气海绵盖；另一端如法炮制，使菌筒两端都接上菌种；

h、接好菌的菌筒置于完全黑暗的培养箱或培养间中25℃恒温培养，保持通风，培养箱或培养间保持相对湿度60 %，菌种培养期间间隔1-2天翻转一次菌筒，保证菌丝生长一致，7-10天，待菌丝长满菌筒后，菌筒培养结束；

i、在超净工作台上将培养好的菌筒一端打开，将菌种转移到无菌的透气纸袋中，将带菌的谷粒压散，置于阴凉通风处悬挂晾干；

j、完全晾干的菌种可装入无菌自封口塑料袋中，贴上菌种标签，注明菌种名称及日期，在4℃条件下避光保存；或者装入真空包装袋中，抽真空后，置于-20℃条件下长期保存。

2.根据权利要求1所述方法制得的小麦赤霉病谷粒菌种使用方法，包括以下操作步骤：

一、检测活性：在干净的培养皿中铺一张滤纸，加入少量灭菌蒸馏水，使滤纸完全湿润，每个培养皿中放入50粒谷粒菌种，使菌种完全散开，加盖后贴上菌种标签，置于完全黑暗的培养箱中25℃恒温培养，36小时后观察菌丝生长情况，若谷粒菌种周围长满白色菌丝，表明菌种具有活性，若谷粒菌种未生长菌丝，则表明菌种失去活性，安排2-3次重复，记录并统计具有活性菌种的比例，若具有活性菌种占90%以上，则可用于田间接菌；

二、采用单花接菌法进行接菌，接菌时期为小麦抽穗后至扬花前，接菌部位为小麦基部最下方小穗一侧往上数第6个小穗的右侧小花，选取抽穗2-3天的穗子，用镊子夹取一粒谷粒菌种，放入目标小穗右侧小花的内稃中，用手持喷雾水壶对准接菌穗子喷2-3下纯净水，保持穗子湿润，将穗子包一层透明保鲜膜，或用PE塑料袋套住该麦穗保湿，悬挂标签，记录接菌时间，每行材料接菌至少10个穗子；

三、接菌后注意观察接菌部位，保湿3-5天，待接菌小穗外稃变褐后，取下保鲜膜或塑料袋；

四、加装弥雾保湿系统，每日喷水5-10次，使其生长环境保持湿度大于50%，湿度越大越有利于赤霉菌扩展，若气候干燥，则适当增加喷水次数；

五、分别于接菌后21天和28天调查赤霉病发病情况。