[发明专利]一种NHS残留的检测方法

说明书

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种NHS残留的检测方法，该方法采用液相色谱检测，所述液相色谱优选亲水性液相色谱(HILIC)。本发明通过添加剂及其浓度、流动相pH、溶剂、柱温、洗脱方式等多个条件的筛选与优化，最终得到了较好的分离效果。本发明的NHS液相检测方法，不同于一般的反相分离模式，样品无需进行柱前特殊处理，操作简单快捷，准确度高，灵敏度高，能够满足药物质量控制需求。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种NHS残留的检测方法，更具体的是一种NHS残留的液相色谱检测方法。

背景技术

N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)是一种重要的有机合成中间体，在医药生产领域中应用广泛，同时也可以用于合成丁胺卡那霉素、放射性药物的标记、制造生物医学材料。NHS也是一种生物相容性较好的新型交联剂，可用作胶原、明胶等三维网状结构的生成，其交联效率高，交联较为稳定，毒性低，近年来越来越受到关注。

交联工艺完成后，交联剂本身的残留定量检测是个亟待解决的问题，但目前NHS残留含量的检测方法并不成熟，如本发明前期尝试了反相色谱法和体积排阻色谱法，发现均不能满足检测需求，故急需寻找到一种高效、精准的NHS残留检测方法。

发明内容

本发明目的在于填补现有技术空白，提供一种新的准确、快速、可靠和高灵敏度的NHS残留的液相检测方法。

本发明首先提供了一种NHS残留的检测方法，该方法采用液相色谱检测，所述液相色谱优选亲水性液相色谱(HILIC)。

优选的，所述液相色谱检测方法以键合了酰胺基团的亚已基桥杂化颗粒(BEH)为固定相。

优选的，所述液相色谱检测方法中流动相由pH值为9.0的10mM乙酸铵溶液和乙腈组成。

优选的，所述液相色谱检测方法中检测波长为265nm。

优选的，所述液相色谱检测方法中流速为0.2ml/min。

优选的，所述液相色谱检测方法中柱温为30℃。

优选的，所述液相色谱检测方法中洗脱方式为等度洗脱。

优选的，所述液相色谱检测方法检测时，配制NHS的标准品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，绘制NHS的标准曲线；供试品按照相同的检测条件进行检测，根据标准曲线计算供试品中NHS的含量。

本发明的NHS液相检测方法，不同于以往的反相分离模式，样品无需进行柱前特殊处理，操作简单快捷，准确度高，灵敏度高，能够满足日常检测需求。

附图说明

图1反相色谱法NHS的出峰情况；

图2不同乙腈含量下NHS的出峰情况；

图3体积排阻色谱法NHS的出峰情况；

图4不同流动相下NHS的出峰情况；

图5不同溶剂条件下NHS的出峰情况；

图6不同pH条件下NHS的出峰情况；

图7全波长扫描；

图8不同乙酸铵浓度下NHS的出峰情况；

图9不同柱温下NHS的出峰情况；

图10不同洗脱方式下NHS的出峰情况，其中a为梯度洗脱色谱图；b为等度洗脱色谱图；

图11不同浓度NHS液相检测图谱中峰面积和对应浓度的标准曲线。

具体实施方式

实施例1比较实施例