[发明专利]一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法

说明书

本发明提供了一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法。该技术方案首先考察了土茯苓中落新妇苷四种异构体间的相互转化关系，意外发现在抗坏血酸存在下，特定的pH及温度条件能启动落新妇苷向新落新妇苷的异构化反应，基于这种有益的发现，本发明以异构化方向、转化程度、产物分解程度等为导向，摸索了最佳的反应条件；在该条件下，落新妇苷主要异构化为新落新妇苷，并且分解速度较慢。以此为基础，本发明进一步设计了前端的浸提条件以及后续的纯化方法。应用本方明方法，可将土茯苓中落新妇苷大部分转化为新落新妇苷，从而使土茯苓提取物中新落新妇苷含量提高近9倍，极大地提高了从土茯苓中分离纯化新落新妇苷的效率。

技术领域

本发明涉及植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法。

背景技术

落新妇苷，即2(R):3(R)-3’,4’,5,7-4羟基磺烷酮-3-α-L-吡喃鼠李糖，是中药土茯苓的主要功效成分。落新妇苷有多种生物活性，如选择性免疫抑制、调节脂肪代谢、抗氧化、护肝作用等。

根据落新妇苷分子结构，其在C2和C3位上存在立体异构现象，分别有2(R):3(R)(落新妇苷)、2(S):3(S)(新落新妇苷)、2(S):3(R)(新异落新妇苷)和2(R):3(S)(异落新妇苷)四种异构体。化合物的异构现象可能会影响其生物活性，一些药物的两种对映体有着完全不同的药理作用。因此有必要针对其异构体的生物学活性展开研究。

土茯苓中同时含有落新妇苷的四种异构体，但落新妇苷含量最高，其他三种异构体含量很低，因此，采用常规浸提的方法只能得到以落新妇苷占绝大成分的提取物，既无法实现异构体之间的分离，也无法提升新落新妇苷成分的占比。因此从土茯苓中直接分离落新妇苷的方法目前已较为成熟，而从中获取新落新妇苷的方法却鲜有报道，即使有研究者取得了一定的成功，其收率也处于较低水平。这极大阻碍了新落新妇苷的性质研究以及深度应用。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，以解决现有技术中缺乏一种此类方法的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是，在以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法中，如何提升收率。

本发明要解决的再一技术问题是，常规提取方法所获得的土茯苓提取物中，落新妇苷占主要成分，而新落新妇苷占比很低。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种以土茯苓为原料制备新落新妇苷的方法，包括以下步骤：

1)取土茯苓，粉碎后过20～40目筛，取浓度为10～90％(v/v)的乙醇水溶液作为提取剂，以筛过物的质量与所述提取剂的体积之比为1:20(kg:L)的比例，将所述筛过物与所述提取剂混合，于室温条件搅拌60min，过滤，取滤液；

2)将步骤1)所得滤液在60℃条件下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；

3)将步骤2)所得浓缩液的pH调整至5～9，向其中加入抗坏血酸至终浓度为0.1～10mM，于50～90℃环境中静置反应6～16h。

作为优选，该方法还包括以下步骤4)：取步骤3)所得产物，利用树脂吸附、重结晶、硅胶柱层析、半制备色谱或高速逆流色谱从中提取新落新妇苷纯品。

作为优选，步骤4)具体包括以下操作：取步骤3)所得产物，流过H103大孔树脂床进行吸附，然后用4倍柱床体积的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；应用半制备色谱收集所述洗脱液中新落新妇苷成分，冷冻干燥。

作为优选，步骤4)中所述大孔树脂床的柱床体积为160ml，柱床高度为60cm；所述乙醇溶液的浓度为50％(v/v)。

作为优选，步骤1)所述乙醇水溶液的浓度为50％(v/v)。